[发明专利]用于大鼠肝细胞分离的肝脏灌流方法及其灌流装置

权利要求书

1.用于大鼠肝细胞分离的肝脏灌流方法，其特征在于，包括以下步骤：

(i)用无钙离子缓冲液灌流大鼠肝脏，以破坏器官的细胞连接；

(ii)用酶缓冲液灌流大鼠肝脏，同时使用称重装置对酶缓冲液灌流期间的大鼠肝脏的重量进行持续测定，当大鼠肝脏的重量增加率在预定持续时间内小于或等于预定阀值标准时，停止缓冲液的输送；

(iii)将大鼠肝脏移至平皿中，加入基础培养液；

(iv)去除大鼠肝脏的包膜等结缔组织，过滤后获得细胞悬液。

2.根据权利要求1所述的用于大鼠肝细胞分离的肝脏灌流方法，其特征在于，对于步骤(ii)，所述预定持续时间至少为90s，所述重量增加率的预定阀值标准为1％。

3.根据权利要求1所述的用于大鼠肝细胞分离的肝脏灌流方法，其特征在于，对于步骤(ii)，所述缓冲液的停止输送条件还包括肝脏重量增加率至少为70％。

4.根据权利要求2或3所述的用于大鼠肝细胞分离的肝脏灌流方法，其特征在于，对于步骤(ii)，大鼠肝脏的重量测定包括以下步骤：

(S1)确定大鼠肝脏的初始重量；

(S2)将大鼠肝脏放置在称重平台上，在步骤(ii)开始后，以一定的频率持续检测灌流重量；

(S3)将每一个灌流重量进行标准化计算为相对于初始重量的重量变化分数；

(S4)使用玻尔兹曼拟合函数对标准化后的数据进行平滑处理；

(S5)查找获得最新的平滑处理后的重量数据，并确定该重量数据增加1％后需要经过的时间；

(S6)如需要经过的时间小于90s，继续灌流，如需要经过的时间大于90s，进行下一步判断；

(S7)如最新的平滑处理后的重量数据小于初始重量的70％，阻碍缓冲液从大鼠肝脏流出持续3s，如大于初始重量的70％，停止灌流。

5.根据权利要求1-4任一所述的用于大鼠肝细胞分离的肝脏灌流的灌流装置，其特征在于，包括称重平台、灌流系统和数据处理系统，所述灌流系统包括通过输液管依次连接的缓冲液罐、蠕动泵、恒温器、气泡收集器和穿刺针，所述称重平台电性连接数据处理系统，称重平台上放置有大鼠肝脏。

6.根据权利要求5所述的灌流装置，其特征在于，所述称重平台包括置物架，所述置物架中央设置有通孔，所述通孔上设置有筛网，所述筛网上放置有大鼠肝脏，置物架下方连接有称重传感器，所述称重传感器电性连接数据处理系统。

7.根据权利要求6所述的灌流装置，其特征在于，所述缓冲液罐设置于通孔下方。

8.根据权利要求5所述的灌流装置，其特征在于，所述数据处理系统为个人电脑，所述数据处理系统电性连接蠕动泵。