[发明专利]一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒及检测方法，该检测试剂包括试剂盒体、抗原蛋白KLH、包被抗原蛋白的酶标板、生物素标记的山羊抗小鼠酶标二抗、标准品KLH抗体、样品稀释液、洗涤缓冲液、底物显色液A液、底物显色液B液和终止液；所述包被抗原蛋白的酶标板中，抗原蛋白KLH的包被浓度为80～85μg/mL；所述生物素标记的山羊抗小鼠酶标二抗的稀释倍率为1:16000～1:20000，本发明的小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒，有效实现TDAR实验从定性到定量的转变，可直接进行小鼠TDAR实验的定量分析，并且具有检测灵敏度高，特异性强、操作便利和实用性好的特点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒及检测方法。

背景技术

TDAR是B细胞接触T细胞依赖性抗原后产生的抗体反应，在Th2细胞的参与下并产生特异性抗体的一种免疫功能反应。近年来TDAR试验被认为是检测药物潜在免疫毒性预测性较好的功能性试验，通过人为引入外来抗原KLH并检测KLH特异性IgG抗体生成水平，反映待测物对免疫系统整体的影响，预测免疫功能的改变，并能对药物的免疫调节和免疫毒性特点进行早期预测，因此该方法在药物免疫毒理学研究中逐渐得到广泛应用。

然而，传统的TDAR试验由于存在抗原特异差、操作复杂及变异性大等问题，导致该试验的特异性、灵敏性、精密性、重复性及可操作性等都存在很大缺陷。KLH(keyholelimpet hemocyanin)KLH比SRBC具有性质稳定、易标准化和容易获得的优点，更适合作为T细胞依赖性抗原，与SRBC法相比变异性小，结果稳定。KLH做为特异性抗原的TDAR试验方法虽然有诸多优点，但目前也存在一些问题。首先灵敏性问题，不同的免疫剂量、免疫途径及周期可产生不同的免疫效果。其次，TDAR试验检测方法大多采用间接ELISA法，实验结果以定性为主，而对于不同的免疫抑制药物或刺激药物未必都能体现免疫毒性。一些已知免疫抑制剂如化疗药物，本身就存在免疫抑制，需要考察的是免疫抑制程度，可能需要与之相适应的免疫方法，例如定量分析。因此，鉴于这些情况，若能研究出一种可通过定量分析KLH特异性抗体生成量来评价TDAR结果，将极大提高TDAR试验的灵敏性及可实用性，特别是在评价一些肿瘤化疗药的免疫抑制程度显得尤为重要。

发明内容

鉴于此，本发明提出一种检测灵敏度高，特异性强，并且能够进行定量分析的小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒，其特征在于：包括试剂盒体、抗原蛋白KLH、包被抗原蛋白的酶标板、生物素标记的山羊抗小鼠酶标二抗、标准品KLH抗体、样品稀释液、洗涤缓冲液、底物显色液A液、底物显色液B液和终止液；所述包被抗原蛋白的酶标板中，抗原蛋白KLH的包被浓度为80～85μg/mL；所述生物素标记的山羊抗小鼠酶标二抗的稀释倍率为1:16000～1:20000。本发明提出的一种小鼠TDAR实验定量分析检测试剂盒，涉及免疫功能定量分析检测技术，包含了免疫蛋白及与之相匹配的检测系统，能够进行有效的T细胞依赖性抗体反应(TDAR)定量分析，其主要是通过采集被特异性抗原蛋白KLH免疫的Balb/c小鼠血清，并结合特定的KLH抗原包被浓度、以及山羊抗小鼠酶标二抗和相应的待检血清的稀释倍率，以满足定量分析的配比条件，使检测系统可通过OD值有效定量分析TDAR实验结果，克服现有实验只能定性分析而不能进行定量分析的缺陷，从而达到了TDAR实验从定性到定量的转变，可直接进行小鼠TDAR实验的定量分析，其具有检测灵敏度高，特异性强、操作便利和实用性好的特点。

进一步说明，所述样品稀释液为每100ml含有BSA 1g，NaCl 0.8g，KCl 0.02g，KH₂PO₄ 0.024g，Na₂HPO₄ 0.144g，其余为去离子水。