[发明专利]生丝微菌LXL-PQ-409及其应用

权利要求书

1.一种生丝微菌LXL-PQ-409，保藏号为：CCTCC NO：M 2019284。

2.如权利要求1所述的生丝微菌LXL-PQ-409在发酵生产吡咯喹啉醌中的应用。

3.利用权利要求1所述的生丝微菌LXL-PQ-409发酵生产吡咯喹啉醌的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将所述的生丝微菌LXL-PQ-409点种于固体培养基表面进行活化培养；

2）将固体培养得到的菌苔接种至液体培养基进行液体培养，得到摇瓶种子液，并可按1～5%（v/v）接种量进行扩大培养，得到种子液；

3）将种子液接种至发酵培养基中进行高密度发酵生产，并从生丝微菌LXL-PQ-409发酵液中提炼制得吡咯喹啉醌。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述步骤1）中固体培养基由以下重量百分比的组分：甲醇 1～3%、（NH₄)₃C₆H₈O₄ 0.3～1.0%、KH₂PO₄ 0.1～0.3%、Na₂HPO₄ 0.1～0.3%、MgSO₄·7H₂O 0.1%～0.2%、微量元素液0.05～0.09%、琼脂1～2%、余量为水，pH=6.5～7.5。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述步骤1）中活化培养条件为：培养温度为28～35℃，培养时间为3～9天。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述步骤2）中液体培养基由以下重量百分比的组分：甲醇 1～3%、乙醇0.1～0.3%、（NH₄)₃C₆H₈O₄ 0.3～1.0%、KH₂PO₄ 0.1～0.3%、Na₂HPO₄0.1～0.3%、MgSO₄·7H₂O 0.1%～0.2%、微量元素液0.05～0.09%、余量为水，pH=6.5～7.5。

7.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述步骤2）中液体培养条件为：培养温度为30～35℃，转速为200～250 rpm，培养至对数期获得种子液，发酵液菌浓达到OD值为10～25。

8.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述步骤3）中发酵培养基含有以下重量百分比的组分：甲醇5～9%、乙醇0.1～0.3%、（NH₄)₃C₆H₈O₄ 0.3～0.5%、KH₂PO₄ 0.1～0.3%、Na₂HPO₄0.1～0.3%、MgSO₄·7H₂O 0.1～0.2%、微量元素液0.05～0.09%，硫胺素0.1～0.3%、蛋氨酸0.05～0.09%、消泡剂0.1%、余量为水，甲醇采用流加方式。

9.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述步骤3）中发酵条件为：培养温度为30～35℃，搅拌转速为300～1000 转/分，发酵时间为6～9天；采用pH-stat或pO₂-stat方式进行底物实时反馈流加调控，pH为6.8～7.2，pO₂为20～35%，实现高密度培养发酵，细胞湿重达30～85克/升。

10.如权利要求3所述的方法，其特征在于所述步骤3）中发酵液中提炼吡咯喹啉醌具体为：发酵液经过滤，获得含有吡咯喹啉醌的澄清液；澄清液经DEAE Sephadex A-25吸附纯化，得到吡咯喹啉醌粗制品；吡咯喹啉醌粗制品经高速逆流色谱分离精制提炼，获得吡咯喹啉醌精品。