[发明专利]一种BHK-21细胞系BHK-21-BP-2克隆株及其在全悬浮细胞培养中的应用

说明书

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种BHK‑21细胞系BHK‑21‑BP‑2克隆株及其在全悬浮细胞培养中的应用。本发明提供BHK‑21‑BP‑2克隆株，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17588。该克隆株在进行全悬浮细胞培养接种伪狂犬病毒后，细胞病变快，产生病毒毒价高，24h～48h即可收毒；收毒时只需离心收获上清，不需反复冻融，生产工艺简单；生产的病毒抗原液的总蛋白含量低，获得的有效病毒抗原完整性高，抗原质量好，具有优异的免疫原性和安全性；制备的伪狂犬病毒疫苗具有稳定性高、批间差异小、免疫效果好、安全性高的优势。

技术领域

本发明属于兽用生物制品技术领域，具体涉及一种BHK-21细胞系BHK-21-BP-2克隆株及其在全悬浮细胞培养中的应用。

背景技术

伪狂犬病是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PRV)引起的多种家畜和野生动物的急性传染病。猪是该病毒的最主要宿主，新生仔猪及15日龄以内的仔猪表现明显的神经症状，死亡率达100％；育肥猪常呈隐形感染，成年猪感染后多耐过，但长期排毒，表现为流产、死胎、木乃伊胎等。近年来，由于伪狂犬病毒发生新的变异株的流行，导致许多伪狂犬疫苗免疫猪场发生伪狂犬病。国内生产伪狂犬病疫苗的方法主要采用转瓶培养工艺，但由于该方法存在疫苗批间差异大、生产效率低、占用场地多等缺点，已经越来越不适合当前疫苗大规模生产的要求。近几年，针对伪狂犬病毒变异株的灭活苗的新产品研发成为新的研究热点。此外，随着悬浮培养生产技术的发展，利用悬浮培养生产病毒抗原的方法可进一步降低生产成本，提高产品品质。

目前，在伪狂犬病毒大规模培养方面，有利用微载体生物反应器培养伪狂犬病病毒的报道，也有利用细胞全悬浮培养伪狂犬病毒抗原的报道，其中，不依赖微载体进行细胞的全悬浮培养比微载体悬浮培养的操作更简便。专利申请CN104740627利用细胞悬浮工艺规模化生产伪狂犬弱毒活疫苗；专利申请CN105727277A利用生物反应器制备猪伪狂犬病毒疫苗。采用全悬浮细胞培养病毒时，用于生产病毒的细胞的性能以及细胞与病毒之间的适应性极大地影响病毒的产量、抗原的完整性等抗原质量，进而影响病毒制备疫苗的免疫效果和安全性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适用于全悬浮细胞培养、高效制备高质量病毒的BHK-21细胞系BHK-21-BP-2克隆株，以及利用该克隆株进行全悬浮细胞培养制备病毒抗原的方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供一种BHK-21细胞系BHK-21-BP-2克隆株，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17588。

本发明提供的BHK-21-BP-2克隆株为对BHK-21细胞进行人工驯化筛选获得的能够进行全悬浮培养的细胞株。乳仓鼠肾细胞BHK-21BHK-21-BP-2克隆株(以下简称BHK-21-BP-2克隆株)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCCNo.17588，建议的分类命名为乳仓鼠肾细胞BHK-21。

BHK-21-BP-2克隆株能够在培养瓶或生物反应器中不依赖于任何载体进行全悬浮培养，其适宜的最佳培养条件如下：36.5±0.5℃，pH 7.2±0.1，溶氧30％～60％。

本发明进一步提供含有所述BHK-21-BP-2克隆株的产品。

所述产品包括但不限于含有BHK-21-BP-2克隆株的试剂。所述试剂除含有BHK-21-BP-2克隆株外，还可含有其它细胞株或本领域允许的辅料。

本发明经实验证实，BHK-21-BP-2克隆株能够在接种病毒后较短时间内产生较高的毒价，并且制备的病毒抗原液的总蛋白含量较低，含有有效病毒抗原的比例高，病毒抗原的完整性高，具有良好的免疫原性和安全性。