[发明专利]一株屎肠球菌G12的筛选及应用

说明书

本发明提出一株屎肠球菌G12，它分离自贝类肝胰脏内，既安全又具有益生特性，菌株Enterococcus faecium，命名为屎肠球菌G12，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保藏编号为CGMCC NO.15230，保藏日期为2018年1月17日。该菌株耐热性强，抗逆性高，益生性显著，对常见水产致病菌维氏气单胞菌具有较明显抑制作用，并对大部分广谱抗生素敏感，可耐受小肠高胆盐环境并在肠道中定殖，适合作为饲料添加剂广泛应用于水产养殖中，可以大大减少水产养殖中传统抗生素的添加对环境的污染及对人类健康造成的不利影响，实现水产养殖业的可持续发展。

技术领域

本发明涉及水产用微生物添加剂技术领域，尤其涉及一种对水产常见致病菌维氏气单胞菌具有明显抑制作用、并且对大部分光谱抗生素敏感的屎肠球菌(Enterococcusfaecium)的分离鉴定、安全性试验以及抗逆性能的鉴定及应用。

背景技术

屎肠球菌(Enterococcus faecium)是一类厌氧、不产孢子的革兰氏阳性菌，菌体圆形或椭圆形，呈链状排列，不产芽孢。在血平板上可形成灰白色、不透明、表面光滑、直径为0.5-1mm的圆形菌落。根据中国农业部发布的《饲料添加剂品种目录》中明确规定饲用微生物添加剂的种类，屎肠球菌位列其中，成为了微生态制剂常用益生菌种，对于提高幼年畜禽体增重、提高动物免疫力、调节肠道微生态平衡，减少腹泻率、降低死亡率等方面均有显著的效果。尽管屎肠球菌被广泛应用，但在水产养殖领域，从水产动物自身中筛选出益生菌并应用的报道却相对比较少。由于水产养殖中使用的很多益生菌并非从水产动物或者生活环境中筛选出来，而是来自某些陆生动物，由此造成益生菌菌株无法定殖或不稳定，只有从宿主本身筛选出的土著微生物才可以更好地适应环境，更高效的抑制病原菌。另外，还要考虑从宿主本身筛选的屎肠球菌潜在的致病性与耐药性。如果选用的屎肠球菌具有致病性，动物食用后将对机体本身带来危害。另一方面，细菌对抗生素的耐药性有水平传递作用，很可能将耐药性水平传递给其他致病菌，这样动物机体的整体耐药性将升高，对动物疾病的治疗十分不利。因此，如何从水产宿主本身筛选出非致病性、对抗生素敏感的土著益生屎肠球菌，以作为优良的水产养殖微生物添加剂，是目前需要解决的技术问题。

发明内容

本发明针对现有技术的缺陷，提供一株从水产贝类中筛选分离出的既安全又具有益生特性的益生菌。该菌株耐热性强、抗逆性高、益生性显著，对常见水产致病菌维氏气单胞菌具有较明显抑制作用，并对大部分广谱抗生素敏感。利用生理生化特征、16S rDNA方法鉴定，该菌株与屎肠球菌(Enterococcus faecium)显示出最高的同源性(99％)，因此鉴定为屎肠球菌，并命名为屎肠球菌G12，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保藏编号为：CGMCC NO.15230，保藏日期为2018年1月17日。

优选的，屎肠球菌G12是从贝类肝胰脏内分离筛选得到。

进一步优选的，屎肠球菌G12是从菲律宾蛤仔肝胰脏内分离筛选得到。筛选之初，我们从菲律宾蛤仔肝胰脏内分离筛选得到12株菌株，本发明所申请的屎肠球菌为其中的第12株菌株，因此保藏时我们将其名称为屎肠球菌G12。

本发明还提出该屎肠球菌G12在水产养殖中的应用，该应用是通过使屎肠球菌G12定殖于肠道中并发挥益生作用，可以显著提高水产生物的存活率和增重率，对常见水产致病菌维氏气单胞菌具有明显抑制作用。

在该应用中，屎肠球菌包括至少一个下述的具体作用：

(1)提高水产生物存活率；

(2)提高水产生物增重率；

(3)抑制维氏气单胞菌；

(4)不产生溶血素；

(5)0.9％的胆盐耐受性；