[发明专利]一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡

说明书

本发明属于抗体工程与免疫检测领域，具体涉及一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡。该纳米花免疫测流层析检测卡包括样品垫、纳米花金标垫、硝酸纤维素膜（NC膜）、吸水垫和塑料卡壳。所述的NC膜上设置有C线和T线，所述的C线上喷有羊抗鼠的IgG抗体，而所述的T线上包被有牛乳铁蛋白抗原。所述的金标垫上含有纳米花金标记的鼠源单克隆IgG抗体。本发明能够通过竞争法纳米花免疫检测卡，对牛奶中乳铁蛋白进行快速检测，其检测灵敏度为2.4 ng/mL,对牛奶中主要的酪蛋白、血清白蛋白和脱脂牛奶均无交叉反应，所建立的检测方法方便快捷可以直接用于乳产品中乳铁蛋白含量的快速检测。

技术领域

本发明属于抗体工程与免疫检测领域，具体涉及一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡。

背景技术

乳铁蛋白（Lactoferrin，LF）也叫乳运铁蛋白，是转铁蛋白家族的一种多功能蛋白，其相对分子质量约为80 kDa，存在于所有哺乳动物的分泌液中，尤其是在牛乳中存在最为广泛。乳铁蛋白具有营养、抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等作用，目前已经在食品、药品和化妆品中得到了广泛的应用。此外，在食品安全检测中它可以作为评价奶产品质量的一项重要指标，因此对于乳制品中乳铁蛋白含量的快速检测显得尤为重要。

目前，检测样品中乳铁蛋白含量的方法主要包括高效液相色谱法，离子交换层析，分光光度法，核酸适配体和表面等离子共振技术等方法。这些方法都利用分析化学的检测手段对样品进行分离和鉴定，可以实现乳铁蛋白的定量检测。然而，这些方法的操作都需要实验室技术人员的操作以及对样品的预处理，有些还会用到昂贵的实验仪器，因此对样品中乳铁蛋白的快速检测带来了一定的困扰。抗体可以在体内或体外通过结合抗原表位的方式参与免疫防御，免疫检测和免疫应答的过程，从而广泛应用于个包括医学在内的各个领域。抗原抗体反应具有比例性，可逆性和高度的特异性，因此可以被用作免疫检测以及免疫诊断，目前已经被广泛应用于免疫印迹（WB）、免疫组织化学（IHC）、酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫胶体和纳米花金层析技术（GICA）。应用纳米花金标免疫检测卡可以对乳铁蛋白进行快速大批量的定量检测，而且不需要对样品进行前处理，从而省去了繁琐的步骤和样品处理时间。与其他化学检测方法相比较而言，该检测卡具有灵敏度高，特异性强，快速，简便等特点，被广泛应用于食品安全检测中。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速和特异性较强的一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡，该检测能够满足竞争法纳米花标记免疫检测卡检测牛奶及其乳制品中乳铁蛋白的要求，实现对牛乳铁蛋白的快速灵敏检测。

为了实现上述目的，本发明提供了一种牛乳中乳铁蛋白竞争法纳米花免疫测流层析检测卡，检测卡包括样品垫、纳米花金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫和塑料卡壳；所述的NC膜上设置有C线和T线，所述的C线上喷有羊抗鼠的IgG抗体，所述的T线上包被有牛乳铁蛋白抗原；所述的金标垫上含有纳米花标记的抗LF单克隆抗体；所述抗LF单克隆IgG抗体是由保藏编号为CGMCC NO. 17087的杂交瘤细胞株3E2分泌获得。杂交瘤细胞3E2菌株，于2019年1月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.17087，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心地址为中国，北京，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

所述金标垫中所含有纳米花标记的抗LF单克隆抗体，是由纳米花金标记的抗LF单克隆IgG抗体溶液以100 mm/s和1.25 μL/cm的喷涂速度通过喷金点膜机喷涂在金标垫上干燥后得到的；所述抗体溶液的浓度为0.04 mg/mL。