[发明专利]一种用于生物柴油生产的小球藻藻株的筛选方法

说明书

本发明涉及一种用于生物柴油生产的小球藻藻株的筛选方法。该方法从淡水水体中取样，经过增殖培养、分离、纯化、形态学与分子生物学鉴定，最终确定筛选得到的小球藻藻株的种名。采用本发明所述的方法，可以快速筛选得到适用于生物柴油生产的小球藻藻株，有利于实现小球藻规模化培养、推动生物柴油商业化生产。

技术领域

本发明涉及小球藻培养技术领域，具体涉及一种用于生物柴油生产的小球藻藻株的筛选方法。

背景技术

微藻被认为是最有发展前景的生物柴油原料，与陆生植物相比，具有更高的光合作用效率，可以更有效地利用二氧化碳；与能源作物相比，具有更快的生长速率和更高的油脂产出效率，节约土地资源，生产生物柴油的成本更低。

小球藻是一种单细胞微藻，细胞呈球形或椭球形，直径2-10μm，以似亲孢子方式进行无性繁殖，生长速度快，光合效率高，分布广泛，主要生长于土壤、潮湿的岩石表面以及淡水中，对环境的适应能力较高，易于大规模培养。小球藻是目前研究最深入、最有吸引力的用于生产生物柴油的微藻藻种，是优质的生物柴油原料。单位面积小球藻油脂产出效率明显高于其他植物油料作物，与同等量的以油菜籽或大豆为原料的生物柴油相比，小球藻生物柴油所需的土地资源大约是前者的1/132-1/49。另外，微藻生物柴油是可再生、降低温室效应、对环境友好的生物质能，基本无毒、不含硫类、可生物降解，提取油脂后的微藻副产品可作为土壤肥料或用于乙醇提取。小球藻生长速率快、容易培养，所需的环境条件对基于土地资源的农业基本无影响，其大规模的培养不会对人类食物供应链产生重大影响。

产油小球藻的藻株选择应该综合考虑含油量、生长速度、对胁迫条件的可接受性、油脂的提取难度以及对生态环境可能的危害性等多方面因素。选取高品质的油藻藻株，对于小球藻规模化培养、实现生物柴油商业化生产至关重要。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的是提供一种用于生物柴油生产的小球藻藻株的筛选方法，经过增殖培养、分离、纯化、形态学与分子生物学鉴定，筛选得到适用于生物柴油生产的小球藻藻株，以促进小球藻的规模化培养。

本发明采用的技术方案是：一种用于生物柴油生产的小球藻藻株的筛选方法，该筛选方法包括以下步骤：

S1.采集水样，进行增殖培养：

S2.采用BG11固体培养板分离方法对采集的水样中的藻株进行分离；

S3.对分离后的藻株进行纯化培养，并对培养得到的微藻藻株进行编号，观察藻株形成的藻落的形状、颜色；

S4.将纯化培养得到的藻株在BG11培养基内培养至指数生长期，适当稀释后直接在光学显微镜下观察，记录藻细胞的形态特征；

S5.收集指数生长期藻细胞，用植物基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，以其作为模板，利用PCR技术扩增18SrDNA基因片段；扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离后测序，确定藻株的属名；

S6.基于测序得到的18SrDNA序列用软件MEGA4.0构建系统发育树，确定藻株的种名。

进一步地，步骤S1的具体方法如下：从淡水河流中采集水样，用纱布过滤掉所采集的水样中的肉眼可见的沙石和浮游生物，取一定体积的过滤后的水样，加入装有BG11液体培养基的三角瓶内，将三角瓶置于光照培养箱内，静置培养7天，培养温度为25±1℃，光照强度为2500LX左右，光照时间为24h，每天定时晃动4次。

进一步地，所述水样与培养基的体积比为1：2，水样的体积为25mL，培养基的体积为50mL。