[发明专利]一种能提高淋巴瘤Daudi细胞转染标记物表达量在混合细胞中所占比例的方法

说明书

本发明涉及一种能提高淋巴瘤Daudi细胞转染标记物表达量在混合细胞中所占比例的方法，所述方法中使用到淋巴瘤Daudi细胞。本方法提高了标志物表达量，使表达标志物的细胞在混合细胞总数中所占比重高于普通转染方法的2倍左右。

技术领域

本发明属于细胞技术领域，涉及肿瘤细胞种类的选择，尤其是一种能提高淋巴瘤Daudi细胞转染标记物表达量在混合细胞中所占比例的方法。

背景技术

在实验中需要用到带标记的肿瘤细胞时，通常会通过慢病毒转染后加以培养以获得能表达标记物的肿瘤细胞，一些没有被转染的细胞和被转染的细胞混合在一起培养，因为没有被转染的细胞分裂增殖比被病毒侵染的细胞分裂增殖快，所以往往很难把握住培养的时间，培养时间过短，达到一定数量的细胞就需要更多的病毒转染，很浪费昂贵的病毒。如果培养时间过长，所得到的细胞里面被转染的细胞所占比重就小，虽整体然数量达到了，但标记物的表达量却不合格。

具体地，现有技术中存在如下缺陷：

1、现有转染方法培养后所得到的细胞中，标记物表达量往往很难达到实验所需标准，

2、现在没有一种方法能够实现一次转染后就能保证转染效率高，并且标记物表达量所占比例大；

3、目前也没有方法能使转染Daudi细胞后仅目标细胞处于越长越多、其他杂细胞越长越少；

4、多次转染意味着需要很久的时间，通常是好几周甚至数月才能完成该实验部分，不仅仅浪费时间，其浪费的试剂耗材和人力是得不偿失的。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种能提高淋巴瘤Daudi细胞转染标记物表达量在混合细胞中所占比例的方法，该方法提高了标志物表达量，使表达标志物的细胞在混合细胞总数中所占比重高于普通转染方法的2倍左右。

本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：

一种能提高淋巴瘤Daudi细胞转染标记物表达量在混合细胞中所占比例的方法，所述方法中使用到淋巴瘤Daudi细胞。

而且，所述方法中先在孔板里集中转染，待荧光显现后转移到培养瓶中转染扩增。

而且，所述孔板为24孔板。

而且，所述方法中需要使用筛选目的细胞的操作，筛选目的细胞时用于筛选目的细胞的试剂为嘌呤霉素，使用时其添加的终浓度为0.8ug/ml。

而且，所述方法中需要使用转染操作，转染操作时所选用的慢病毒的TU大于5x10⁸个/ml，设置MOI等于80。

而且，步骤如下：

⑴培养淋巴瘤Daudi细胞，至培养密度为5x10⁵个/ml，使用加入1％双抗的10％胎牛血清的配制培养基，置于CO₂浓度5％、温度37℃的培养箱中培养至活率大于95％、细胞总量大于1x10⁶个/ml，备用；

⑵在生物安全柜中转染，取TU大于5x10⁸个/ml的慢病毒进行转染，转染体系设置200ul，使用24孔板进行转染，取6个中央孔区，每孔细胞量为5x10⁵个，转染使用未添加血清的配制培养基200ul，24小时后换液，添加10％胎牛血清的配制培养基，隔天换一次液，培养3天；

⑶取换液培养3天后的淋巴瘤Daudi细胞在荧光显微镜下观察荧光强度，目测转染效率大于30±1％，计数后按照5x10⁵个/ml转入T25培养瓶中，添加嘌呤霉素0.8ug/ml，隔天换液并保持生长密度5x10⁵个/ml；连续培养7-10天；