[发明专利]一种单粒子双发射比率荧光探针的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种单粒子双发射比率荧光探针的应用，是以所述单粒子双发射比率荧光探针作为检测试剂用于农药福美双的检测；包括如下步骤：

步骤1：金纳米粒子的制备

将50 mL 1mM的HAuCl₄溶液加热至沸腾，后注入5 mL 1%的柠檬酸三钠，继续回流10min，冷却后置于4℃保存；

步骤2：比率荧光探针的猝灭

取所述双发射比率荧光探针溶液60 μL置于比色皿中稀释至2 mL，记录原始蓝色和红色荧光强度比，随后逐步加入步骤1制备的金纳米粒子，453nm处荧光发射峰逐渐下降，呈现出荧光强度比的变化，直至蓝色荧光猝灭；

步骤3：福美双的检测

向步骤2获得的混合体系中分别加入浓度从0-10μM的福美双溶液，453nm处蓝色荧光发射峰逐渐恢复，644nm处荧光发射峰几乎不变，通过建立荧光强度比与福美双浓度之间的关系，实现福美双的定量检测，同时借助紫外灯下可呈现一系列不同颜色的变化，实现可视化检测；

所述单粒子双发射比率荧光探针是利用stöber法制备羧基化包埋红色CdTe量子点的氧化硅，然后表面共价偶联氨基化的蓝色碳点，构建获得双发射比率荧光探针；

所述比率荧光探针的蓝色与红色荧光强度比为5:1；

所述单粒子双发射比率荧光探针的制备包括如下步骤：

（1）氨基化蓝色碳点的制备

将0.6 g聚乙烯亚胺和1 g柠檬酸溶解在30 mL超纯水中，随后转移到50 mL反应釜中，200℃下反应6 h，冷却至室温后，用截流分子量为1KDa的透析袋透析48 h，4℃保存；

（2）红色碲化镉量子点的制备

2a、将0.0638 g碲粉和0.10 g NaBH₄混合于4 mL超纯水中，持续通入氮气，保持无氧环境，冰浴下搅拌反应8-10h，反应液逐渐由黑色变为粉色到白色，上层液中有NaHTe生成；

2b、将0.2284 g氯化镉与210 μL巯基丙酸溶解在100 mL超纯水中，用1 M的NaOH溶液调节pH值至9，然后通入氮气鼓泡除去溶液中的氧气；

2c、将0.5-1M的稀硫酸在绝氧环境下注射到步骤2a的NaHTe溶液中，使生成的H₂Te转移到步骤2b的氯化镉溶液中，生成CdTe量子点的前驱体，加热并回流48 h，冷却至室温，得到红色荧光的CdTe量子点，后置于15 W的紫外灯下照射24h以提高荧光量子产率；使用前纯化后再次溶于超纯水中，最终得到巯基丙酸包覆的碲化镉量子点原液；

（3）羧基化的包埋红色CdTe量子点的氧化硅纳米粒子的制备

步骤2c获得的巯基丙酸包覆的碲化镉量子点原液与质量分数为25%-28%氨水各1 mL溶于40 mL乙醇中，烧瓶用铝箔包裹避光，搅拌均匀后加入160 μL正硅酸四乙酯，搅拌4 h，继续加入240 μL正硅酸四乙酯，搅拌4 h，然后加入24 μLγ-氨丙基三乙氧基硅烷，继续反应熟化12 h；然后依次用乙醇和纯水洗涤，得到氨基化的氧化硅粒子，将其溶于25 mL N，N-二甲基甲酰胺中并滴加至25 mL 0.1 M的丁二酸酐溶液中，反应24 h，得到羧基化的包埋红色CdTe量子点的氧化硅纳米粒子；

（4）比率荧光探针的构建

将（1）获得的碳点300 μL及5 mg的缩合剂溶于10 mL超纯水中，搅拌均匀后加入5 mg（3）获得的羧基化的包埋红色CdTe量子点的氧化硅纳米粒子，搅拌12 h，离心并洗涤后分散于超纯水中得到比率荧光探针。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

步骤（2）中，所述纯化是通过超滤透析或不良溶剂沉淀的方法来进行纯化，不良溶剂为乙醇、丙酮或异丙醇。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：

步骤（4）中，所述缩合剂为1-( 3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺和N-羟基丁二酰亚胺，两者质量比为1:1。