[发明专利]提高嵌合抗原受体T细胞疗效和作用持久性的细胞培养方法

说明书

本发明提供一种提高嵌合抗原受体T细胞疗效和作用持久性的细胞培养方法，通过添加络氨酸激酶抑制剂达沙替尼(dasatinib)减少CAR‑T细胞活化信号传递，抑制了CAR‑T细胞的终末分化，提高了CAR‑T细胞制品中的初始T细胞和中心记忆T细胞的比例，同时抑制CAR‑T细胞的耗竭倾向。本发明方法解决了体外培养过程中CAR‑T细胞的终末分化和耗竭倾向的难题。本发明方法培养过程简单易行，成本低廉，临床应用安全可靠；培养得到的CAR‑T细胞初始T细胞和中心记忆T细胞比例高，并避免了CAR‑T细胞的耗竭倾向，重复性好；培养得到的CAR‑T细胞展现出更好的治疗疗效和体内维持持久性，具有广泛的应用推广价值。

技术领域

本发明属于免疫学和细胞治疗研究领域，涉及一种提高嵌合抗原受体T细胞疗效和作用持久性的细胞培养方法，是应用络氨酸激酶抑制药物提高CAR-T细胞中初始T细胞和中心记忆T细胞，减少CAR-T细胞耗竭的培养方法。

背景技术

嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor modified T,CAR-T)细胞免疫疗法近年成为免疫靶向治疗中最具发展前途的一种治疗手段，其作用原理是利用基因工程技术，将能识别某种肿瘤抗原的特异性单链单克隆抗体的抗原结合部与T细胞受体的酪氨酸活化基序及共刺激分子在体外偶联为一个嵌合蛋白，通过病毒载体等方法转染T细胞，使T细胞能够特异性识别肿瘤细胞并将信号传递至胞内，引起T细胞的增殖活化从而通过释放穿孔素/颗粒酶靶向杀伤肿瘤细胞，且不受主要组织相容性复合体(MajorHistocompatibility Complex,MHC)的限制。近年来CAR-T治疗已应用于白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、脑胶质瘤、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌、胰腺癌及卵巢癌等肿瘤。其中在血液系统恶性肿瘤中的研究取得的成绩最为瞩目。目前已开展针对如CD19、CD22、CD20、CD33、CD30、CD38、BCMA、CD138、CD123等靶点的CAR-T细胞临床治疗研究。其中最显著的疗效主要体现在B细胞来源恶性肿瘤性疾病中的应用，如急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)，慢性淋巴细胞白血病(CLL)，多发性骨髓瘤(MM)，B细胞淋巴瘤(B-NHL)等。国际上报道的靶向CD19的CAR-T(CART19)细胞治疗难治/复发B-ALL，完全缓解率(CR)达到90％。CAR-T细胞疗法在血液肿瘤治疗上的突破性进展给该研究领域带来了新的希望，尤其是传统治疗后无效或复发，在临床治疗决策者束手无策的情况下，CAR-T细胞免疫治疗成为最好的治疗选择。

但在接受靶向CD19的CAR-T细胞治疗患者中，复发成了CAR-T细胞治疗的主要障碍，约30-50％的患者在接受CAR-T细胞治疗后复发，且复发大多发生在接受CAR-T细胞治疗1年内；而大多数实体瘤予靶向CAR-T细胞治疗疗效欠佳。目前认为靶向CD19的CAR-T细胞治疗后原发病复发主要的原因是CAR-T细胞在体内的丢失，也即不能在体内长期维持；证据显示，CAR-T细胞治疗后患者的长期无病生存与CAR-T细胞在体内的维持时间高度相关。而CAR-T细胞耗竭不仅是靶向CD19的CAR-T细胞治疗血液系统肿瘤性疾病后肿瘤复发的重要因素，同时也是治疗实体瘤疗效欠佳的重要原因。因此开发提高CAR-T细胞疗效，延长CAR-T细胞在体内维持的方法，对提高CAR-T细胞治疗肿瘤性疾病的疗效、防止疾病复发和提高患者长期无病生存率至关重要。