[发明专利]用于促进皮肤干细胞和胶原母细胞再生组合物及制备方法

说明书

本发明公开了一种用于促进皮肤干细胞和胶原母细胞再生组合物，包括20～30%的羧甲基纤维素、30～40%的PBS缓冲液、5～10%的甘油和25～35%的聚己内酯‑蛋白结合物；其中，聚己内酯‑蛋白结合物由聚己内酯与人皮肤成纤维细胞的活性蛋白按照质量比2～5:1的质量比结合获得。本发明的以上用于促进皮肤干细胞和胶原母细胞再生组合物，以皮肤成纤维细胞的活性蛋白作为修复功能成分，相比采用生长因子一方面起效比较直接，不会如生长因子大大影响注入脸部后脸部细胞自身的代谢，避免了外源性刺激改变细胞代谢水平的问题，并且可以通过缓释的方式逐步起效。

技术领域

本发明涉及制备生物工程技术领域，尤其涉及一种用于促进皮肤干细胞和胶原母细胞再生组合物及制备方法。

背景技术

皮肤作为人体最外层的组织，起着保护人体不受外部刺激或伤害的作用。随着年龄老化或者受到外伤，皮肤在视觉外观、物理特性和生理功能上均发生明显生理活性或代谢能力降低，直至逐渐衰退或消亡，所以修复和美容被认为是美容学上最重要的篇章。

而现有在美容学上对这些曾经受过外伤或者老化的皮肤组织的治疗措施，一种方式通常是采用向脸部注射皮肤填充物、胶原蛋白刺激物一方面填充或者弥补伤痕，同时能促进脸部细胞生长和转化的因子，对脸部细胞生理功能和代谢活动发挥调节作用。或者，在另一种比较缓和的方式是将具有促进功能的生长因子以一定的有效浓度添加到化妆品中，可以有效地与皮肤细胞发生作用，促进上皮细胞营养代谢，有效地促进皮下胶原细胞的功能，加速皮肤胶原细胞的生长，使细胞加速分泌胶原，从而达到修复和美容的功能。

但是以上这些具有真实效果的生长因子功能成分，通常制备方法繁琐，成本高，得到的生长因子浓度低，从而造成了这一类真正具有效果的产品往往售价非常高昂。

基于以上情形，CN201811367770.4号专利提出了一种通过干细胞培养后裂解的方式，制备干细胞激活素，后再将干白细胞激活素注入脸部，通过干细胞激活素促进上皮细胞营养代谢，部分能起到预防以及治愈由于各种原因导致的皮肤损伤、使细胞加速分泌胶原蛋白等的作用。

但是这一种激活素产品，在使用尤其是注入不同患者脸部后，一方面用量极难控制，很容易引起排异反应；另一方面，激活素注入后很快就会被代谢掉，半衰期较短，真实效果不太稳定。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种能具有缓释且低排异反应的脸部修复美容的蛋白刺激注射组合物，旨在使脸部修复美容组合物在效果稳定发挥的同时，还能非常快速地大量生产和制备，降低产品价格。

为实现上述目的，本发明提供的用于促进皮肤干细胞和胶原母细胞再生组合物，包括质量百分数的20～30%的羧甲基纤维素、30～40%的PBS缓冲液、5～10%的甘油和25～35%的聚己内酯-蛋白结合物；其中，

所述聚己内酯-蛋白结合物由聚己内酯与人皮肤成纤维细胞的活性蛋白按照质量比2～5:1的质量比结合获得；且所述人皮肤成纤维细胞的活性蛋白由如下步骤制备获得：

获取人皮肤成纤维细胞样本并进行培养，获得人皮肤成纤维细胞。

对所述培养获得的人皮肤成纤维细胞进行细胞破碎，取人皮肤成纤维细胞蛋白；

取家兔皮肤创面成纤维细胞并进行传代培养；

将培养的家兔皮肤创面成纤维细胞进行细胞破碎后提取蛋白，并用提取的蛋白作为抗原对大鼠进行免疫，获取多克隆抗体。

以所述多克隆抗体作为层析介质制备亲和层析柱；

将人皮肤成纤维细胞蛋白于所述多克隆抗体的亲和层析柱，进行层析过柱，即获得所述人皮肤成纤维细胞的活性蛋白。

优选地，所述PBS缓冲液的pH为7.0～7.5。

优选地，所述获取人皮肤成纤维细胞样本并进行培养过程中，用FGF和EGF进行诱导培养。