[发明专利]与硼砂特异性结合的核酸适配体及利用SELEX筛选方法和应用

说明书

本发明属于生物医学技术领域，公开了一种与硼砂特异性结合的核酸适配体及利用SELEX筛选方法和应用，所述的核酸适配体是单链DNA，由82个核苷酸组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；其二级结构含有突出的环和茎，其中Bor‑B02吉布斯自由能DG＝‑11.90。基于酶联寡核苷酸吸附测定法进行核酸适配体特异性、亲和力和灵敏度等一系列性质评估，显示Bor‑B02解离常数Kd＝21.64±2.732nM，且能特异性与硼砂结合，因此该核酸适配体具有高特异性、高亲和力的特点，可用于后续对硼砂的快速检测试剂盒的应用中。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，尤其涉及一种与硼砂特异性结合的核酸适配体及利用SELEX筛选方法和应用。

背景技术

硼砂，一般写作Na2B₄O₇·10H₂O，是非常重要的含硼矿物及硼化合物，通常为无色晶体的白色粉末，易溶于水。硼砂可用作清洁剂、化妆品、杀虫剂，也可用于配置缓冲溶液和制取其他硼化合物等。硼砂的毒性较高，是一种强致癌物质，对人体的胃、肾脏、肝脏、脑和皮肤损害极大，硼砂的成人中毒剂量为1-3克，成人致死量为15克，婴儿致死量为2-3克。人体若摄入过多的硼砂，会引发多脏器的蓄积性中毒。长期过量摄入硼砂，对人体生殖、发育和内分泌系统有毒性影响。短时间摄入大剂量硼砂，可能导致急性中毒，轻者引起头晕、头痛、食欲不振、消化不良、体重减轻等症状；严重者出现呕吐、腹泻、休克、昏迷等中毒表现。硼砂中毒者的病理检查可见胃、肾脏、肝脏、脑和皮肤出现非特异性病变，主要有肝脏充血、脂肪变性、肝细胞混浊肿胀；肾呈弥漫性水肿，肾小球和肾小管均有损害；脑和肺出现水肿。不法生产者和商贩为了增加食品的韧性、脆度口感，或延长保存期限，往往会在食品的加工过程中违法添加硼砂。由于硼砂的强致癌性和较强毒性，世界各国普遍禁止将硼砂添加于食品中，我国《食品卫生法》和《食品添加剂卫生管理办法》中明令禁止将硼砂作为食品添加剂使用。

目前我国尚未出台用于直接检测食品中硼砂的标准方法，现行的国家标准《食品安全国家标准—食品中硼酸的测定》(GB 5009.275-2016)是通过检测硼砂的分解产物硼酸的含量从而间接计算出食品中硼砂的含量。现行市面上最为认可的检测方法是乙基己二醇-三氯甲烷萃取姜黄比色法。该法需要先在酸性条件下将硼砂转变为硼酸，通过检测硼酸的含量来间接推算出硼砂的添加量。由于样品前处理环节中的酸化与多次过滤操作，令检测液中的硼酸成分出现部分损失，从而使得该检测方法的结果具有一定的偏差，且检测结果只能表示食品中存有硼酸，并不一定是直接添加了硼砂。综上所述，现有技术存在的问题是：检测结果具有一定的误差，且法实现食品中硼砂的直接检测。因此为了保证广大人民群众的身体健康，填补市面上直接检测硼砂方法的空缺，建立一种准确可靠、灵敏快速、广泛适用的直接检测食品中硼砂的方法显得尤为重要。

核酸适配体是经过指数富集配体系统进化技术(SyStematic evolution ofligandS by exponential enrichment，SELEX)筛选得到的能与金属离子、小分子、生物大分子，甚至整个细胞高特异性、高亲和性结合的ssDNA或RNA分子。核酸适配体不仅具备抗体分子的识别特性，凡是涉及抗体的诊断领域，几乎都可以用核酸适配体来代替，而且还具备自己独特的优异性能，其具有靶分子范围广、分子质量小、免疫原性低、易于化学合成、改造和标记等优点。近年来核酸适配体在治疗新药、药物运输、癌细胞检测、生物成像、生物标志物的发现、毒品检测、抗病毒等生物医学领域中的应用。因此，可将核酸适配体技术运用到食品检测领域，可以实现食品中硼砂的直接检测。且通过该技术建立的检测方法无需较为繁琐的样品预处理步骤，能够降低硼砂的损耗，使得检测结果更为准确可靠。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种与硼砂特异性结合的核酸适配体及利用SELEX筛选方法和应用。

本发明是这样实现的，一种与硼砂特异性结合的核酸适配体，所述与硼砂特异性结合的核酸适配体核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。