[发明专利]一种高纯度枸杞糖肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种高纯度枸杞糖肽的制备方法，是将枸杞或枸杞废渣粉碎、过筛、亚临界脱脂、高速剪切低温破壁水提、高速离心、微滤膜分离、微滤膜浓缩、无机/有机双水相萃取、大孔吸附树脂除杂、乙醇沉淀、冷冻干燥得到高纯度枸杞糖肽。经检测，该提取物中的有效成分枸杞多糖含量≥80%。本发明利用30kD的微滤膜分离枸杞糖肽，只获取分子量低于30kD的枸杞糖肽，而将分子量大于30kD的枸杞糖肽弃去，因为后者在体内代谢慢，导致大量累积会诱发“上火”，并且此部分枸杞糖肽的生物活性低；采用纳滤膜浓缩、双水相萃取、大孔吸附树脂除杂、乙醇沉淀四种纯化技术，保证了所获得枸杞糖肽的纯度和品质。

技术领域

本发明涉及一种枸杞糖肽的制备工艺，尤其涉及一种高纯度枸杞糖肽的制备工艺，属于中药活性成分提取分离技术领域。

背景技术

枸杞子，是茄科植物枸杞(Lycium barbartum L.)的干燥成熟果实，其名出自《神农本草经》，至今已有3000余年的历史，是最早获得卫生部批准的药食两用物质。中药典籍对枸杞子的药用功效多有记载，现代药理学和天然产物化学研究表明，枸杞糖肽（LBP）是枸杞子的主要活性成分之一，是酸性杂多糖、多肽或蛋白质组成的复杂糖肽结构，含量为3%~9%。研究表明，枸杞糖肽是一种水溶性蛋白多糖，95%以上的成分是糖苷复合物，主要包括葡萄糖、阿拉伯糖、甘露糖、木糖、鼠李糖和果糖等成分，还有各种多糖复合物。枸杞糖肽具有以下生理学功能：1）免疫调节作用：枸杞糖肽能够提高吞噬细胞的吞噬功能，提高T淋巴细胞的增值能力，同时促进细胞免疫和体液免疫进而发挥免疫调节作用；2）延缓衰老作用：枸杞糖肽可以提高谷胱甘肽和超氧歧化酶的活性，清除过量的自由基，降低丙二醛和脂褐素含量，通过抑制骨髓基因c-myc的表达，从而抑制细胞凋亡，最终达到延缓衰老，提高机体生命力的目的。也可以通过降低乙型淀粉样蛋白(Ab-peptide) 的毒性、降低谷氨酸的兴奋性神经损伤、降低同型半胱氨酸(homocysteine)引起的神经损伤以及降低同型半胱氨酸导致的神经元凋亡多种机制发挥延缓衰老的作用；3）降血糖作用：枸杞糖肽能够增强受损胰岛细胞内的超氧歧化酶活性，提高胰岛细胞的抗氧化能力，减轻过氧化物对细胞的损伤，降低丙二醛生成量，从而发挥降血糖作用；4）肝脏保护作用：枸杞糖肽通过增加细胞内活性氧清除酶活性，提高了机体抗氧化保护机制，使得氧自由基能被及时清除，而非蓄积于细胞内，引发细胞脂质过氧化，导致细胞受损。通过调节抗氧化物酶，抑制肝细胞凋亡，保护肝细胞，进而减少肝损伤的发生。5）抗疲劳作用：枸杞多糖能显著增加肌糖原、肝糖原储备量，提高运动前后血液乳酸脱氢酶总活力，降低运动过后尿素氮含量增加量，加快运动后血尿素氮的清除率，对缓解疲劳和加速消除疲劳具有十分明显的作用。6）抗肿瘤作用：枸杞多糖通过提高巨噬细胞吞噬能力、脾细胞抗体形成、淋巴细胞转化反应、细胞毒性T淋巴细胞杀伤功能以及降低脂质过氧化能多种途径实现对肝癌、结肠癌、宫颈癌、胃癌、白血病等多种癌症的抑制作用；7）眼部保护作用：枸杞糖肽作用于感光细胞和视网膜神经节细胞，可以减轻视网膜色素变性病人视力退化，对视网膜色素变性、青光眼、糖尿病视网膜病变具有良好的效果。

目前，枸杞糖肽提取制备方法的报道较多，主要分为直接热水浸提法和有机溶剂（乙醚、石油醚、乙醇等）脱脂后的热水浸提法。这些常规的方法不仅会使枸杞糖肽受高温影响，空间结构变化致使活性下降，也会耗费大量的有机溶剂，造成环境污染。因此，研发绿色高效的枸杞糖肽产业化方法具有重要的意义。CN104311690B报道了一种枸杞多糖的提取方法，具体为：将枸杞粉碎，过40~80目筛，得到枸杞粉，加入料液比1:5~1:10的水，浸泡8~16小时，加入活性炭脱色，加入纤维素酶酶解，再加入碱性蛋白酶和无花果蛋白酶，在微波条件下酶解，酶解后浓缩并脱色，离心，取上清液浓缩醇沉，再离心，干燥得到枸杞多糖。该方法得到的枸杞多糖纯度固然较高，但是浸泡提取8~18小时，增加了生产成本，微波和高温灭酶的过程都可能造成枸杞糖肽空间结构和变化，致使活性和品质下降，活性炭脱色会吸附大量的枸杞糖肽活性成分。

发明内容

本发明的目的是提供一种高纯度枸杞糖肽的制备方法。