[发明专利]L-脯氨酸在提高冬虫夏草菌芽生孢子数量和菌丝生物量中的应用

说明书

本发明公开了L‑脯氨酸在提高冬虫夏草菌芽生孢子数量和菌丝生物量中的应用。本发明针对冬虫夏草菌液体发酵过程中如何提高菌丝生物量以及人工仿生培养虫菌结合冬虫夏草过程中如何得到大量感染用芽生孢子的问题，在冬虫夏草菌培养基中添加L‑脯氨酸，诱导冬虫夏草菌高效产生芽生孢子，添加L‑脯氨酸的培养基在接入冬虫夏草菌孢子培养30d后芽生孢子数量较未添加组提高1.49～5.26倍，培养45d后的芽生孢子数量提高17～52.6倍，培养60d后菌丝干重提高15.67～66.44％。本发明能更高效获得芽生孢子用于感染蝙蝠蛾仿生培养虫菌结合冬虫夏草，同时能提高冬虫夏草菌液体发酵获得菌丝体的效率，缩短冬虫夏草人工培养的时间，降低培养成本。

技术领域：

本发明属于真菌培养技术领域，具体涉及L-脯氨酸在提高冬虫夏草菌芽生孢子数量和菌丝生物量中的应用。

背景技术：

冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis是我国传统的名贵中药材，与人参、鹿茸被誉为中华医学三大宝。冬虫夏草是由冬虫夏草菌(又名中华被毛孢，中国被毛孢)侵染蝙蝠蛾科Hepialidae幼虫形成的僵虫与真菌子座复合体。冬虫夏草生境特殊(仅在高海拔高寒草甸环境自然繁衍)，生长速度缓慢，周期较长，自然资源极为有限。虽然冬虫夏草已被列入《国家重点保护野生植物名录》二级保护物种，但冬虫夏草的过度采挖并没有得到有效遏制。在栖息地退化、全球气候变暖，尤其是冬虫夏草的过度开发利用等多种因子的综合影响下，天然冬虫夏草资源蕴藏量急剧下降(Hopping KA,Chignell SM,Lambin EF.The demiseofcaterpillar fungus in the Himalayan region due to climate change andoverharvesting.Proc Natl Acad Sci USA.2018,115:11489-11494)。

我国自20世纪70年代后期就开始冬虫夏草菌人工培养技术，通过对冬虫夏草菌无性型菌丝体的发酵培养已开发生产出多种替代产品，如冬虫夏草菌发酵菌丝体制成的“百令胶囊”已作为国家重要一类新药。另外，通过模拟青藏高原生态环境，利用冬虫夏草菌侵染蝙蝠蛾幼虫成功培养出冬虫夏草。因此，如何提高冬虫夏草菌丝深层发酵技术，提高菌丝生物量，有利于节约菌丝培养时间和成本；另外，利用注射芽生孢子的方式感染蝙蝠蛾幼虫能缩短仿生培养冬虫夏草周期，如何快速获得大量用于感染用的芽生孢子对冬虫夏草人工培养非常重要。

发明内容：

基于上述问题，本发明的目的是提供一种L-脯氨酸在提高冬虫夏草菌芽生孢子数量和菌丝生物量中的应用。在冬虫夏草菌培养基中加入L-脯氨酸能提高培养液中冬虫夏草菌芽生孢子数量以及冬虫夏草菌丝生物量，为冬虫夏草人工培养产业提供重要的技术支撑。

本发明通过实验发现，在冬虫夏草菌培养基中加入L-脯氨酸可以提高冬虫夏草菌芽生孢子的数量和菌丝生物量。

因此，本发明的第一个目的是提供L-脯氨酸在提高冬虫夏草菌芽生孢子数量和菌丝生物量中的应用。

所述的应用是在接种冬虫夏草菌的培养基中加入L-脯氨酸，然后进行培养。

本发明的第二个目的是提供L-脯氨酸在制备提高冬虫夏草菌芽生孢子数量和菌丝生物量制剂中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种提高冬虫夏草菌芽生孢子数量和菌丝生物量的方法，将冬虫夏草菌接种至添加有L-脯氨酸的培养基中培养，获得冬虫夏草菌芽生孢子和菌丝。

所述的培养基优选为液体培养基。

所述的L-脯氨酸，其在液体培养基中的浓度为2.5mg/L-30g/L。

所述的冬虫夏草菌优选为冬虫夏草菌孢子液。

所述的液体培养基优选为每150mL含有30g土豆、1.5g蛋白胨、3g麦芽糖、0.08g硫酸镁、0.25g磷酸二氢钾、3mg维生素B₁，余量为水。