[发明专利]增强型血清禽腺病毒4型亚单位疫苗的制备及其应用

说明书

本发明涉及增强型血清禽腺病毒4型亚单位疫苗的制备及其应用。本发明中，利用杆状病毒表达系统表达禽腺病毒4型纤突蛋白(Fiber‑2)、利用大肠杆菌表达系统构建表达两种细胞因子：白介素2(IL‑2)和干扰素γ(IFN‑γ)，并且将三者混合应用。利用本发明的方法制备疫苗，成本低廉，所获得的疫苗免疫效果良好，能够有效预防禽腺病毒4型的感染。

技术领域

本发明属于免疫学以及疫苗学领域，更具体地，本发明涉及增强型血清禽腺病毒4型亚单位疫苗的制备及其应用。

背景技术

禽腺病毒(fowl adenovirus，FAdVs)可分为3个群：I群、II群和III群。I群又有12个血清型，按照基因型分成A、B、C、D、E 5个分支。其中在中国包涵体肝炎(Inclusion BodyHepatitis，IBH)和心包积液综合征(Hepatitis–hydropericardium Syndrome，HHS)是鸡群主要的两种疾病，它们均由I群腺病毒引起，其中IBH是由FAdV-8b型和FAdV-11型引起，HHS是由FAdV-4型引起。

禽腺病毒在结构上呈无囊膜的球形结构，病毒粒子以晶格状排列存在于感染的细胞核内，颗粒内包含一个36kb的线性双链DNA，与核蛋白形成髓芯。衣壳呈12面体对称，由直径8～10nm的壳粒组成，包含240个非顶点壳粒，称为六邻体，12个顶点壳粒作为五邻体基底。六邻体上的表位是诊断不同血清型的标准，是病毒对免疫选择压力最敏感的部位。每个五邻体基底上结合着2根长9～77.5nm的纤维突起，纤突有血清特异性，并含有负责体外血细胞凝集的种属特异性抗原决定位点。

禽腺病毒引起的疾病正在中国从北到南爆发疫情，给中国禽类养殖行业造成了巨大打击。除了中国，其它的国家也时有发生。

然而，传统灭活减毒疫苗存在灭活病毒质量参差不齐、佐剂搭配不合适、减毒方法不适宜、昂贵的人工成本等问题。因此，本领域亟待进一步地开发效果理想、成本低廉的防治禽腺病毒，以有效地改变这一现状。

发明内容

本发明的目的在于提供增强型血清禽腺病毒4型亚单位疫苗的制备及其应用。

在本发明的第一方面，提供一种制备疫苗组合物的方法，所述方法包括：

(1)重组表达纤突蛋白Fiber-2、白介素2和干扰素γ；

(2)将(1)的纤突蛋白Fiber-2、白介素2和干扰素γ三种蛋白混合，获得免疫组合物。

在本发明的另一方面，提供一种提高纤突蛋白Fiber-2的免疫原活性的方法，其特征在于，所述方法包括：将白介素2、干扰素γ与纤突蛋白Fiber-2混合，从而提高纤突蛋白Fiber-2的免疫原活性。

在一个优选例中，所述的纤突蛋白Fiber-2通过昆虫杆状病毒表达系统表达，所述的白介素2和干扰素γ利用大肠杆菌表达系统表达(较佳地，包括表达包涵体，变性、复性)。

在另一优选例中，在三种蛋白混合后，还包括将它们与药学上或免疫学上可接受的载体混合，获得免疫组合物。

在另一优选例中，混合时，按照重量比，纤突蛋白Fiber-2:白介素2:干扰素γ为(8～20):(0.8～1.2):(0.8～1.2)；较佳地为(9～15):(0.9～1.1):(0.9～1.1)。

在另一优选例中，所述的纤突蛋白Fiber-2是来自禽腺病毒4型的蛋白；较佳地是来自禽腺病毒4型的KR5毒株；更佳地其具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述的白介素2是鸡白介素2；较佳地其具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

在另一优选例中，所述的干扰素γ是鸡干扰素γ；较佳地其具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。