[发明专利]循环肿瘤细胞检测试剂、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种5-ALA用于制备循环肿瘤细胞检测试剂中的应用。

2.一种循环肿瘤细胞检测试剂，其特征在于含有5-ALA。

3.一种循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于包括有核细胞分离管、细胞培养管和细胞培养液，其中，

有核细胞分离管内依次添加有密度1.077—1.082的分离液、密度1.085的有机分离凝胶、以及血液抗凝剂，

细胞培养液含有5-ALA和基础细胞培养液。

4.如权利要求3所述的循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于还包括细胞稀释剂和细胞洗涤液。

5.如权利要求3所述的循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于血液抗凝剂选自柠檬酸钠、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸二钠、肝素锂或肝素钠。

6.如权利要求3所述的循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于有核细胞分离液采用Ficoll分离液，Ficoll分离液由a).Ficoll400和b).泛影葡胺或泛影酸钠组成。

7.如权利要求3所述的循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于有机分离凝胶包括有机胶凝剂、触变剂和密度调节剂。

8.如权利要求3所述的循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于基础细胞培养液采用RPMI1640培养液或M199培养液。

9.一种循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于采用权利要求3~8任一所述的循环肿瘤细胞检测试剂盒进行检测，包括以下步骤：

将血液样本加入有核细胞分离管中与抗凝剂混合均匀，然后在离心力1700g-1900g下离心分离15-20分钟，静止分层，红细胞处于试管下层，上面是有机分离凝胶层，然后是分离液层，最上层是含血小板的血浆成分，有核细胞处于分离液层上部或部分分散于分离液中，将分离液全部吸取供细胞培养使用，

将富集的有核细胞分离液与细胞培养液按照体积比例1:2至1:5加入细胞培养管，在37℃恒温条件下培养2小时，

在培养完成后，将细胞培养管在离心力力700g下离心分离5-10分钟，取离心后的细胞沉淀物涂片，在具备635nm波长的荧光显微镜下观察结果并区分胞浆为紫红色的有核细胞，计数为肿瘤循环细胞。