[发明专利]一种基于双链DNA包被的Ag纳米簇及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种基于双链DNA包被的Ag纳米簇及其制备方法与应用，属于Ag纳米簇技术领域。本发明基于双链DNA包被的Ag纳米簇，其DNA为双链结构，一条链为模板链DNA，另一条链为富含G碱基DNA；其中模板链DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，富含G碱基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；或者模板链DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，富含G碱基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明模板链DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，富含G碱基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的双链DNA/Ag纳米簇证实待检测体系中不存在半胱氨酸和多巴胺的情况下，可使用模板链DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，富含G碱基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的双链DNA/Ag纳米簇来检测体系中是否含有抗坏血酸，并进行定量分析。

技术领域

本发明涉及一种基于双链DNA包被的Ag纳米簇及其制备方法与应用，属于Ag纳米簇技术领域。

背景技术

寡核苷酸包被的银纳米簇(DNA/Ag纳米簇)具有荧光量子产量高、光稳定性好、良好的生物相容性、大的斯托克斯位移等优点，被广泛应用于环境监测和生化分析等领域，备受科研工作者的关注。

目前已有许多文献报导了关于DNA/Ag纳米簇的应用研究：如对金属离子、含巯基化合物、生物小分子、蛋白质和DNA的检测和在细胞成像方面的研究。

现有寡核苷酸包被的银纳米簇(DNA/Ag纳米簇)的缺陷有：DNA序列的选择直接影响其荧光及应用，目前许多文献报导了碱基序列、数目等因素对DNA/Ag纳米簇的荧光及应用的影响，但并没有关于富G碱基序列包被单链DNA/Ag纳米簇程度的不同对DNA/Ag纳米簇的影响及应用的研究；目前有许多方法对各种生物还原剂的检测分析，但还没有利用不同包被程度的DNA/Ag纳米簇来选择性识别抗坏血酸的研究。

发明内容

针对现有技术中寡核苷酸包被的银纳米簇(DNA/Ag纳米簇)的缺陷，本发明提出一种基于双链DNA包被的Ag纳米簇及其制备方法与应用，即合成两种包被程度不同的富含G碱基DNA/Ag纳米簇，从而使其具有检测分析抗坏血酸的功能。

一种基于双链DNA包被的Ag纳米簇：DNA为双链结构，一条链为模板链DNA，另一条链为富含G碱基DNA；其中模板链DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，富含G碱基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；或者模板链DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，富含G碱基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。所述基于双链DNA包被的Ag纳米簇的制备方法，具体步骤如下：

(1)将模板链DNA冻干粉冷冻离心，然后将模板链DNA溶于20～100mol/mL磷酸盐缓冲液中得到模板链DNA缓冲液；

(2)将4～40μmol/mL AgNO₃溶液加入到步骤(1)模板链DNA缓冲液中，快速振荡15～30s后置于避光条件下反应20～30min得到反应体系A；

(3)将1.6～60μmmol/mL NaBH₄溶液加入至步骤(2)的反应体系A中，快速振荡15～30s后置于暗室条件下反应6～18h即得单链DNA/Ag纳米簇溶液，然后置于避光、温度为4～8℃的冰箱中保存备用；

(4)将富含G碱基DNA溶液和步骤(3)的单链DNA/Ag纳米簇溶液混合均匀，再加入磷酸缓冲盐溶液混合均匀，然后在避光条件下反应至两条DNA链完全杂交即得基于双链DNA包被的Ag纳米簇。

所述步骤(1)磷酸盐缓冲液的浓度为20～100mmol/L，磷酸盐缓冲液的pH为6.5～7.5。

所述步骤(1)模板链DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示或如SEQ ID NO.2所示。