[发明专利]一种片状磷酸钙疫苗佐剂及其制备方法

权利要求书

1.一种片状磷酸钙疫苗佐剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将壳聚糖分散于水中，用盐酸调节pH至壳聚糖完全溶解，使得最终的质量百分浓度为0.5%-4%，将浓度为10-40 mg mL -1 的3，4-二羟基苯基丙酸的乙醇溶液和浓度为10-40mgmL -1 的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）水溶液按:0.5:1-4:1比例混合均匀，在快速搅拌下加入壳聚糖溶液中，用氢氧化钠调其pH为5.0-6.0，反应2-12 h，在pH5.0-7.0的盐酸水溶液中透析1-3天后，去离子水透析2-10 h，冻干，即得儿茶酚改性壳聚糖（CSC）；

（2）将0.5-10 ml蛋白质模拟抗原加入到等体积的CSC的水溶液中，搅拌至混合均匀；

（3）将0.4-8 ml磷酸盐缓冲溶液（PBS）加入上述（2）中，400-800r/min搅拌5 min-20min，之后加入2-30 ml CaCl₂水溶液，搅拌5 min-20 min，离心，用去离子水洗涤2-4次，得到片状磷酸钙疫苗佐剂；

所述蛋白质模拟抗原为鸡卵清白蛋白（OVA），所述蛋白质模拟抗原浓度为0.5-5mg/ml；

所述儿茶酚改性壳聚糖（CSC）的浓度为4-12mg/ml；

所述磷酸盐缓冲溶液（PBS）的浓度为0.1-0.5 mol/L，PH为5-7；

所述CaCl₂水溶液的浓度为100 mmol/L；

所述片状磷酸钙疫苗佐剂的为磷酸氢钙二水物，分子式为CaHPO₄•2H₂O。