[发明专利]一种利用木糖促进微藻油脂积累的方法

权利要求书

1.一种利用木糖促进微藻油脂积累的方法，其特征在于，采用以下步骤：

（1）藻种液的制备：在24~26℃下，以BG11培养基培养四尾栅藻，待四尾栅藻生长至对数生长期后期收集藻细胞，用缺氮缺磷的BG11培养基稀释重悬藻细胞至0.35~0.5 g/L作为种子液；

（2）诱导藻细胞积累油脂：配制木糖母液，将木糖母液添加到步骤（1）制备的种子液中稀释木糖浓度为20~30 mmol/L，并置于24~26℃、黑暗异养条件下缺氮诱导培养；

（3）利用有机溶剂提取步骤（2）培养的藻细胞内的油脂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）所述的四尾栅藻为四尾栅藻藻株Scenedesmus quadricauda（FACHB-1297）。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤（2）所述的黑暗异养条件为：培养基中P的浓度保持在3 mg/L以上，所述培养基中其他条件同BG11培养基，黑暗诱导培养2~8天。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于：步骤（2）中异养条件为BG11培养基中含有浓度为20~300 mg/L K₂HPO₄.3H₂O。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中有机溶剂为氯仿-甲醇溶液，其中氯仿-甲醇溶液中氯仿与甲醇的体积比为2:1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述的木糖母液的浓度为1.86mmol/L。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）所述的氯仿甲醇提取藻细胞内的油脂的方法为：

（1）步骤（2）培养得到的培养液经4000 r/min离心分离10min，用NaHCO₃溶液反复洗涤3次后，冷冻干燥成干藻粉，称重备用；

（2）称取0.1g干藻粉于50 ml离心管中，加入10 ml氯仿/甲醇溶液，超声破碎10min，然后4000 r/min离心分离10min，保留有机相，重复操作两次；其中氯仿-甲醇溶液中氯仿与甲醇的体积比为2:1；

（3）将有机相转移到分液漏斗中，加入0.9%的氯化钠溶液（1:5），充分摇匀1min，并静置分层15min，回收下层有机相即为油脂提取溶液，经氮吹后获得油脂；其中有机相和0.9%的氯化钠溶液的体积比为5:1。