[发明专利]一种饲料中匹美西林残留量的测定方法

说明书

本方法公开了一种饲料中匹美西林残留量的测定方法，属于分析检测领域，特别涉及一种使用液相色谱‑串联质谱法测定饲料中匹美西林残留量的高灵敏度检测方法。具体步骤如下：取一定量的样品，加磷酸缓冲盐提取，过PEP固相萃取柱净化，洗脱液过滤膜并上机分析，外标法定量。本发明适用于饲料中匹美西林残留量的测定，方法操作简单，快捷，灵敏度高，定量准确，回收率高的特点。

技术领域

本发明属于分析检测领域，涉及一种饲料中匹美西林残留量的测定方法，特别涉及一种使用液相色谱-串联质谱法测定饲料中匹美西林的高灵敏度检测方法。

背景技术

匹美西林，是人用杀菌剂，主要是用于大肠杆菌、沙门氏菌、肠杆菌属等敏感微生物引起的单纯性或复合性泌尿道感染，以及由此引起的败血症。随着兽药禁用的越来越多，部分不良商人将人用药用于治疗动物疾病，这不仅会导致人畜共患病的频发，而且随着该类药物的大量使用，最终以原药或者其代谢物的形式由粪便排到环境之中，不仅会污染环境，而且也可造成细菌的耐药性，危害人体的健康。

目前关于匹美西林的检测方法的研究较少，我们还未发现饲料中检测匹美西林的测定方法，因此，开发一个测定饲料中匹美西林残留量的方法，对于打击违法用药，减少人畜共患病的发生，保护消费者权益，具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，提供一种饲料中匹美西林残留量的测定方法。

本发明所述的技术问题可通过以下技术方案得以解决：

（1）样品的前处理

取代表性样品约5.0 g (精确至0.01g)，于50 mL聚丙烯塑料离心管中，加入10 mL磷酸缓冲盐溶液，混匀，振荡提取10 min，8000 r/min冷冻离心5 min，收集上清液于另一个50 mL离心管中。残渣另加入10 mL磷酸缓冲盐溶液，重复上述提取步骤，合并上清液，待净化。

（2）固相萃取柱净化

依次用5 mL甲醇和等体积的一级水活化固相萃取柱，将（1）中上清液过固相萃取柱，控制样液流速1-4 mL/min，不要超过5 mL/min流速；然后用5 mL一级水淋洗；再用3 mL0.5 %甲酸乙腈溶液进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液过0.22 μm有机滤膜，上机供液相色谱-串联质谱仪测定。

（3）液相色谱-串联质谱测定

建立液相条件和质谱条件，按照相应条件测定标准工作溶液和待测液，采用外标-标准曲线法进行定性定量分析。

作为优选，在步骤（1）中所述加入的磷酸缓冲盐溶液为pH=8.5的0.15 mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液。

作为优选，在步骤（2）所述的固相萃取柱为PEP柱，规格型号为100 mg/5 mL。

作为优选，在步骤（2）中所述所述的0.5%甲酸乙腈溶液体积比为4：6。

作为优选，在步骤（3）所述所述液相条件为：色谱柱：BEH C₁₈柱，2.1×50 mm，1.8 μm；流动相为甲醇和0.1%甲酸，梯度洗脱，0~1 min，10 %甲醇；1~2 min，10 %~40 %甲醇；2~2.5 min，40 %~95 %甲醇；2.5~3 min，95 %~95 %甲醇；3~4 min，10 %甲醇；进样量为5 μL，流速为0.3 mL/min，柱温为40 ℃。

作为优选，在步骤（3）所述所述质谱条件为：离子源：ESI；扫描方式：正离子；离子源温度：150 ℃；毛细管电压：2400 V； 干燥气流速：800 L/h； 干燥气温度：500 ℃；匹美西林的定量离子对为m/z =440.17/167.20，定性离子对为m/z = 440.17/139.18，碰撞能量分别为40 eV和25 eV。

本发明的有益效果在于：