[发明专利]东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5及其编码基因和应用

说明书

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin‑5及其编码基因和应用。东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin‑5，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明克隆了东亚飞蝗的serpin‑5基因，并通过连接，转化步骤将基因转入大肠单菌体内。通过饲喂serpin‑5纯化蛋白，绿僵菌侵染的蝗虫的死亡率大大降低，并测定蝗虫体内POD和SOD的酶活力，经serpin‑5处理后较绿僵菌的处理组相比，蝗虫体内的两者酶活力都降低到与对照无显著性差异，因此，serpin‑5基因能够作为负调控因子控制病菌的侵入引起的过度免疫反应。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5及其编码基因和应用。

背景技术

丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpins)蛋白家族是一个成员众多、分布广泛的蛋白酶抑制剂家族，能够抑制丝氨酸蛋白酶活性，参与调节生物体内多种生理反应，例如血液凝集、纤维蛋白溶解、补体激活、免疫黑化、生长发育过程中组织构建等。serpins蛋白家族成员功能差异显著，Serpin-6与家蚕表皮黑化、蜕皮变态、先天性免疫等生理过程有关，烟草天蛾serpin3a可以与丝氨酸蛋白酶PAP1和PAP3形成共价复合物而抑制酚氧化酶原(PPO)的激活，烟草天蛾serpin4,5抑制PPO激活是通过抑制上游血淋巴蛋白酶而完成的。在革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌感染时，serpin又涉及不同的调节方式，只有革兰氏阳性菌感染时，serpin4与HP-21形成共价复合物，serpin_5与HP1和HP6结合成共价复合物来抵御感染；在革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌感染时，serpin4与血淋巴蛋白酶HP1和HP6形成共价复合物抑制PPO激活，烟草天蛾serpin6也可以通过调节PAP3和HP8来抑制PPO激活。

发明内容

本发明的目的在于提供一种东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5。

本发明的再一目的在于提供上述东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5的基因。

本发明的再一目的在于提供包含上述基因的重组表达载体。

本发明的再一目的在于提供包含上述基因的重组菌株。

本发明的再一目的在于提供包含上述基因的应用。

本发明的再一目的在于提供上述东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5的应用。

本发明的再一目的在于提供一种绿僵菌抑制剂。

本发明提供的东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5，其氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示：

上述蛋白的分子质量为47.5KD，等电点为8.90。

本发明提供东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5基因，其核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示：

本发明的丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5的cDNA序列长度为1530bp，完整的开放阅读框长为1263bp，完整开放阅读框位于268-1531bp。

本发明提供包含serpin-5基因的重组表达载体，表达载体优选为pMD19-T Vector载体。

本发明提供包含丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5编码基因的重组菌株，重组菌株优选为大肠杆菌BL21。

本发明还提供上述丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5及其编码基因的应用。

本发明还提供绿僵菌抑制剂，其包括上述东亚飞蝗丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin-5。