[发明专利]一种新型血小板交叉配型试剂盒

说明书

本发明公开了一种新型血小板交叉配型试剂盒，该试剂盒包括：U型反应微板、低离子介质、指示系统、阴性对照血清、阳性对照血清。其中，U型反应微板内表面已包被聚乙烯亚胺，利用其高度吸附性和高阳离子絮凝性将血小板吸附至微板孔底；指示系统包含IgG抗‑D致敏的O型红细胞和兔或羊抗人球蛋白试剂。在已吸附血小板单层的微板孔中加入待配型血浆进行免疫反应，最后通过二步法指示系统的显示，就可以快速实现固相法血小板交叉配型。本发明通过创新性的利用聚乙烯亚胺的高絮凝吸附作用、利用高灵敏度的二步法指示系统，切实解决目前临床血小板交叉配型方法中灵敏度低、试剂盒价格偏高等难题，为临床血小板交叉配型提供一种高性价比的新型试剂盒。

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，属于生物技术领域，具体涉及一种新型血小板交叉配型试剂盒。

背景技术

血小板输注作为一种有效的治疗手段，在临床得到了广泛应用。但由于长期输血、药物治疗和疾病本身的影响，导致患者体内容易产生针对血小板抗原的同种抗体，这些抗体作用于人体血小板后，常可导致血小板输注无效症、输血后紫癜等，从而危及患者的生命安全。鉴于此，国家卫计委在《临床输血技术规范》规定，血小板输注前，必须进行交义配型实验，以提升患者的输血质量，保证患者的生命安全。

血小板交叉配型的方法先后经历了血小板免疫荧光实验(PIFT)、流式细胞仪交叉配型(FCM)、微柱凝胶配型、固相凝集法(SPRCA)配型等阶段。PIFT法主要是将献血者的血小板和患者血清孵育后，再与标记了异硫氰酸荧光素的抗人球蛋白孵育，洗涤后在荧光显微镜下观察。该法可以避免一些细胞碎片引起的非特异性反应，缺点在于反应不灵敏。FCM技术是将献血者的血小板与患者的血清孵育后，再加入荧光素标记的抗人-IgG，避光反应后加入PBS悬浮，上机检测分析。该方法比较灵敏，缺点是实验时间较长、需要昂贵的仪器设备和荧光标记抗体，难以在医疗机构进行推广应用。微柱凝胶卡法行血小板交叉配型实验，是建立在传统血小板检测和免疫微柱凝胶基础上的一项新技术。将血小板、血清和指示红细胞加到微柱反应腔中，经孵育和离心后，观察结果。该法操作简便、快速，不需要特别昂贵的设备，缺点是假阳性率较高，结果的判别有一定难度。SPRCA法是利用已做包被处理的板条，将血小板加入板条中离心形成血小板分子单层，然后加入患者血清，经过孵育和洗涤后，加入指示红细胞，并判读结果。该法灵敏度好、特异性强，且简便、快速、不需要特殊设备即可完成，是目前血小板配型领域的主流技术。由于目前使用该方法的产品，多数采用抗血小板抗体进行包被，一方面，成本相对较高；另一方面，传统固相凝集法的包被基质对抗原物质的固定作用较差，且需要一些特殊的步骤，从而限制了其临床应用。因此，有必要对现有的固相凝集法进行改进。

血小板作为一种特殊的血液成分，其表面含有多种糖蛋白，因此，血小板表面荷载了大量的负电荷。在聚合阳离子的作用下，血小板表面所荷载的负电荷可以被中和而引起血小板的吸附性聚集。

聚乙烯亚胺是一种水溶性高分子聚合物，具有一些特殊的性能。1.高附着性和吸附性：聚乙烯亚胺由于具有极性基团(氨基)和疏水基(乙烯基)结构，能够与不同的物质相结合。利用这些综合结合力，可广泛应用于接着，油墨，涂料，粘结剂等领域。2.高阳离子絮凝性：聚乙烯亚胺在水中以聚合阳离子存在，可以中和吸附所有阴离子物质，还能螯化重金属离子。利用其高度的阳离子性，可以应用于造纸水处理，电镀液，分散剂领域。

发明内容

为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种灵敏度好、价格适中、不易造成假阳性或者假阴性，能为临床一线检测工作的血小板配型试剂盒。