[发明专利]一种作为检测用途的白念珠菌简易显色增强方法

说明书

本发明实施例公开了一种作为检测用途的白念珠菌简易显色增强方法，将白念珠菌在沙堡弱培养基培养获得的白念珠菌转接到YPD液体培养基中，30℃振荡培养6‑8h，获得白念珠菌菌液；将所述白念珠菌菌液离心获得白念珠菌体加入含有碳酸氢钠的第一溶液，并加入含有FITC的第二溶液混合，得到染色混合液，获得显示增强的白念珠菌。本发明实施例通过含有碳酸氢钠的第一溶液以及含有FITC的第二溶液对白色念珠菌进行染色显色，其染色显色过程简单，染色显色效果好，且可以对未灭活的念珠菌进行染色，大大拓宽了染色白念珠菌的用途。

技术领域

本发明实施例涉及微生物检测技术领域，具体涉及一种作为检测用途的白念珠菌简易显色增强方法。

背景技术

白念珠菌作为一种条件性致病菌，白念珠菌引起的机会性真菌感染呈逐年上升趋势。白念珠菌的毒力因子、耐药基因及其与宿主的相互关系仍是研究的热点。白念珠菌如何被机体细胞识别是其感染宿主的首要条件，也被认为是其致病的关键。细胞吞噬白念珠菌试验是研究固有免疫细胞上的模式受体对真菌分子识别模式的重要方法，在该实验的过程中，需要对白念珠菌进行染色，便于观察白念珠菌被细胞吞噬的过程，有助于进一步揭示白念珠菌被细胞识别以及感染细胞的机制。

目前，白念珠菌常规的显色染色方法是用异硫氰酸荧光素(FITC)，加入到灭活的白念珠菌悬液中，37℃避光孵育1h。这种白念珠菌的显色染色方法，对于白念珠菌的染色效率较低，染色效果较差，作为用于检测的白念珠菌，容易造成了以这些染色念珠菌的试验工具获得的实验数据存在误差。

发明内容

为此，本发明实施例提供作为检测用途的白念珠菌简易显色增强方法，以解决现有技术中作为检测用的白念珠菌染色效果差，染色效率低，不能对未灭活菌体进行染色以及染色过程复杂的问题。

本发明的目的在于提供一种操作简单，易于实现的未灭活白念珠菌荧光染色的方法，以克服目前染色方法所存在的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

一种作为检测用途的白念珠菌简易显色增强方法，将白念珠菌在沙堡弱培养基培养获得的白念珠菌转接到YPD液体培养基中，30℃振荡培养6-8h，获得白念珠菌菌液；

将所述白念珠菌菌液离心获得白念珠菌体加入含有碳酸氢钠的第一溶液，并加入含有FITC的第二溶液混合，得到染色混合液，获得显示增强的白念珠菌。

优选的，所述方法包括：将所述染色混合液37℃振荡染色1-2h。

优选的，所述方法包括将所述染色混合液4℃避光10-14h。

优选的，所述第一溶液还包括摩尔浓度为1mM/L的EDTA，质量分数为0.01％Tween-20以及质量分数为0.1％NaN₃；

所述碳酸氢钠的摩尔浓度为0.05M/L。

优选的，所述第二溶液是将50mg FITC溶于1ml DMSO制备得到的。

优选的，所述方法还包括将所述菌体离心后，再用PBS洗两遍，并将菌液浓度调整为5×10⁵cfu/mL的过程。

本发明实施例具有如下优点：

本发明实施例通过含有碳酸氢钠的第一溶液以及含有FITC的第二溶液对白色念珠菌进行染色显色，其染色显色过程简单，染色显色效果好，染色效率高，且可以对未灭活的念珠菌进行染色，大大拓宽了染色白念珠菌的用途。

附图说明