[发明专利]细胞微囊、载有抗癌药物的细胞微囊、其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种细胞微囊、载有抗癌药物的细胞微囊、其制备方法和应用。细胞微囊的制备方法包括如下步骤：(1)培养免疫细胞，取细胞上清液；(2)将步骤(1)所述的细胞上清液离心以去除细胞及细胞碎片，取上清液；(3)将步骤(2)所述的上清液离心以去除凋亡小体，取上清液；(4)将步骤(3)所述的上清液离心，取沉淀，即得；步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2000‑3000g，离心时间为40‑100min。该制备方法操作简单，可获得具有优良生物活性、结构完整、纯度高、粒径均一的细胞微囊，将所得细胞微囊通过简单的孵育即可负载脂溶性的抗癌药物，用于预防或者治疗癌症疾病，效果很好，靶向性好，毒副作用低。

技术领域

本发明涉及生物和医药技术领域，特别是涉及一种细胞微囊、载有抗癌药物的细胞微囊、其制备方法和应用。

背景技术

根据世界卫生组织的报道，肿瘤即癌症是世界第二大死因，就全球范围而言，近六分之一的死亡是由癌症造成的。脂质体剂型由于其能减少药物在体内的毒副作用，常被用在临床癌症治疗上。目前，临床上使用的脂质体粒径大小在100nm左右，含有磷脂、胆固醇等脂质成分，但由于其作为外源性物质缺少生物活性，束缚了它进一步发展成为精准治疗的药物载体。机体循环系统中的各种免疫细胞分泌的囊泡具有多种的生理功能，这些功能包括，持久的血液循环寿命、对内源性物质和代谢物的转运能力、对病变部位的趋向性、穿过脂性生物膜屏障，激活免疫系统，刺激血管再生等。鉴于囊泡具有上述所携带的天然生物功能，且粒径范围为50nm～200nm，越来越多的研究者考虑将其开发为新型药物载体。胞外囊泡主要分为三种：凋亡小体、微囊和外泌体，微囊和外泌体均广泛存在并分布在各种体液中，可由多种细胞分泌的膜性囊泡，是体内的信息传递信使，其中外泌体是被研究和被应用的主要对象，而对于微囊的研究较少。

发明内容

基于此，本发明提供了一种细胞微囊的制备方法，该制备方法操作简单，可获得结构完整、纯度高的细胞微囊。

具体技术方案如下：

一种细胞微囊的制备方法，包括如下步骤：

(1)培养免疫细胞，取细胞上清液；

(2)将步骤(1)所述的细胞上清液离心以去除细胞及细胞碎片，取上清液；

(3)将步骤(2)所述的上清液离心以去除凋亡小体，取上清液；

(4)将步骤(3)所述的上清液离心，取沉淀，即得；

步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2000-3000g，离心时间为40-100min。

在其中一些实施例中，步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2400-2600g，离心时间为50-90min。

在其中一些实施例中，步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2400-2600g，离心时间为50-70min。

在其中一些实施例中，步骤(2)中所述离心的条件包括：离心力为400-600g，离心时间为5-80min。

在其中一些实施例中，步骤(2)中所述离心的条件包括：离心力为450-550g，离心时间为8-15min。

在其中一些实施例中，步骤(4)中所述离心的条件包括：离心力为8000-20000g，离心时间为40-80min。

在其中一些实施例中，步骤(4)中所述离心的条件包括：离心力为9000-11000g，离心时间为50-70min。

在其中一些实施例中，所述细胞微囊的制备方法还包括如下纯化的步骤：

(5)将步骤(4)所述沉淀用无菌生理盐水重悬，离心，取沉淀，即得。