[发明专利]一种含肽类化合物的冷冻保存液在卵母细胞或胚胎冻存中的应用

说明书

本发明公开了一种肽类化合物和含有该化合物的冷冻保存液。所述肽类化合物由亲冰氨基酸和亲水基团组成，在水溶液中具有良好的抑制冰晶生长和修饰冰晶形貌的能力，且没有热滞后，生物相容性好，是理想的控冰材料。含有上述肽类化合物的冷冻保存液含有上述肽类化合物和多元醇、水溶性糖等组分，用于胚胎或卵母细胞保存可保持良好的存活率，成分简单，性能稳定。

技术领域

本发明属于生物医用材料技术领域，具体涉及一种含肽类化合物的冷冻保存液在卵母细胞或胚胎冻存中的应用。

背景技术

冷冻保存是指将生物材料保存于超低温状态下，使细胞新陈代谢和分裂速度减慢或者停止，一旦恢复正常生理温度又能继续发育。该技术自问世以来，成为自然科学领域不可缺少的研究方法之一，已被广泛采用。近年来，随着生活压力的增加，人类生育力呈逐年下降的趋势，生育力保存越来越受到人们的重视，人类生殖细胞(精子、卵母细胞)、性腺组织等的冷冻保存就成为保存生育力的重要手段。另外，随着世界人口老龄化加剧，对捐赠的可用于再生医学和器官移植的人源性材料细胞、组织或器官的冷冻保存的需求也极速增加。因此，如何高效的冷冻保存珍贵的细胞、组织以及器官资源以备不时之需成为亟待解决的科学技术问题。

目前最常用的冷冻保存方法为玻璃化冷冻。玻璃化冷冻技术虽然在快速冷冻过程中可使细胞内外的液体均成玻璃化状态而避免了冷冻过程中的损伤。但是，在复温过程中，现有的冷冻保存试剂不能有效的控制冰晶的生长，从而损害细胞。目前玻璃化冷冻方法所使用的高浓度(≥15％)有毒的有机溶剂，导致冷冻存活率偏低，且严重影响保存对象(子代)安全性以及功能表达。综上，目前采用的冷冻保存试剂存在不具备复温过程中有效控制冰晶生长的能力，同时存在试剂安全性差的问题。

发明内容

为改善现有技术的上述缺陷，本发明提供一种含肽类化合物的冷冻保存液在卵母细胞或胚胎冻存中的应用。

本发明通过如下技术方案实现：

一种肽类化合物，由亲冰性氨基酸，如：苏氨酸(L-Thr)、谷氨酰胺(L-Gln)、天冬氨酸(L-Asn)等与其他亲水性氨基酸或葡萄糖内酯(GDL)或糖类反应得到，所述其他亲水性氨基酸可选自精氨酸、脯氨酸、丙氨酸等。

根据本发明，所述肽类化合物为两个以上的氨基酸单元形成的肽类，如：2-8个氨基酸单元，具体地可以为2个、3个、4个、5个、6个氨基酸单元；每个氨基酸单元可以相同或不同。

根据本发明，所述肽类化合物中亲冰氨基酸如苏氨酸与其他亲水氨基酸的摩尔比为(0.1-3)：1，优选(0.5-2)：1。

根据本发明，所述肽类化合物为L-Thr-L-Arg(TR),L-Thr-L-Pro(TP),L-Arg-L-Thr(RT),L-Pro-L-Thr(PT)，L-Thr-L-Arg-L-Thr(TRT),L-Thr-L-Pro-L-Thr(TPT),L-Ala-L-Ala-L-Thr(AAT)，L-Thr-L-Cys-L-Thr(TCT)中的至少一种。

根据本发明，所述肽类化合物为GDL-L-Thr。

根据本发明，所述肽类化合物具有式(1)-式(6)所示任一结构：

上述肽类化合物的制备方法，可以采用本领域已知的多肽合成方法合成，例如采用固相合成法合成。

根据本发明的制备方法，包括如下步骤：树脂溶胀、一种氨基保护的氨基酸共价连接在溶胀的树脂上、脱保护、加入另一种氨基保护的氨基酸缩合反应、脱保护、切割、纯化。

根据本发明的制备方法，将葡萄糖内酯(GDL)溶解在有机溶剂中，并将苏氨酸和碱性催化剂加入到有机溶剂里，完全溶解后加入到葡萄糖内酯的溶液中，55-60℃反应，反应结束后，过滤掉白色沉淀物，把滤液蒸干得到粗产物。