[发明专利]一种高粱转录因子SbWRKY45基因及其重组载体和表达方法在审
| 申请号： | 201910281365.9 | 申请日： | 2019-04-09 |
| 公开（公告）号： | CN109971767A | 公开（公告）日： | 2019-07-05 |
| 发明（设计）人： | 谢鑫;蒋君梅;任明见;李向阳;孙涛 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N15/29 | 分类号： | C12N15/29;C07K14/415;C12N15/70 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 张行超 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 高粱 转录因子 基因 重组载体 抗病性 蛋白纯化系统 基因组数据库 原核表达载体 氨基酸序列 核苷酸序列 生物学特性 蛋白晶体 蛋白序列 基因编码 基因构建 基因全长 同源基因 蛋白质 水稻 研究 | ||
1.一种高粱转录因子SbWRKY45基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述高粱转录因子SbWRKY45基因编码的蛋白质，其氨基酸序列如SEQID NO.2所示。
3.包含权利要求1所述基因的重组载体。
4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体的制备方法如下：提取高粱RNA，并反转录出cDNA；以cDNA为模板扩增SbWRKY45基因；将SbWRKY45扩增产物经BamHI和XhoI双酶切后，通过DNA连接酶插入到经同样双酶切的pET-28a表达载体中，得到重组质粒pET-28a-SbWRKY45。
5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，以cDNA为模板，利用以下引物扩增SbWRKY45基因，引物序列如下：
上游引物：SbWRKY45-F：GC
下游引物：SbWRKY45-R：CG
上下游引物分别如SEQ ID NO.3、4所示。
6.一种表达高粱转录因子SbWRKY45基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用权利要求3或4所述的重组载体转化大肠杆菌细胞，得到表达SbWRKY45的重组原核表达菌株；
(2)将重组原核表达菌株接种到卡那霉素或卡那霉素+氯霉素液体培养基中，过夜培养活化菌株；
(3)将活化的重组原核表达菌株转接到卡那霉素或卡那霉素+氯霉素液体培养基中，震荡培养后加入IPTG诱导重组SbWRKY45的表达；
(4)诱导完成后，回收并纯化所表达的SbWRKY45重组蛋白。
7.根据权利要求6所述的表达高粱转录因子SbWRKY45基因的方法，其特征在于，步骤(3)中在震荡培养至OD600＝0.5时，加入终浓度为0.8mM的IPTG，在25℃诱导培养。
8.根据权利要求6所述的表达高粱转录因子SbWRKY45基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素液体培养基中卡那霉素为50ug/mL。
9.根据权利要求6所述的表达高粱转录因子SbWRKY45基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素+氯霉素液体培养基中卡那霉素为50ug/mL，氯霉素为50ug/mL。
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