[发明专利]一种处理含脑膜脓毒性金黄杆菌的再生水的方法

权利要求书

1.一种处理含脑膜脓毒性金黄杆菌的再生水的方法，其特征在于，包括下列步骤：

(a)在含脑膜脓毒性金黄杆菌的再生水中加入生物絮凝剂溶液，搅拌均匀，所述含脑膜脓毒性金黄杆菌的再生水与生物絮凝剂溶液的体积比为90：(5-10)，该生物絮凝剂溶液的浓度为3-5g/ml；

所述生物絮凝剂的制备步骤如下：

(1)将枯草芽孢杆菌经发酵培养得到发酵液，发酵培养基包括：葡萄糖20gl^-1，牛肉膏3.0gl^-1，NaN0₃ 2gl^-1，KCl 0.5gl^-1，K₂HP0₄ 1gl^-1，MgS0₄·7H₂0 0.5gl^-1，FeS0₄ 0.01gl^-1，pH6.5-7.5，121℃，0.1MPa灭菌30min；接种量计为0.5-2g湿重菌丝/100ml，培养温度为20-35℃，振荡培养，时间为40-120小时，离心除去菌丝体，得到上清液；

(2)将上清液加2倍体积乙醇于4℃条件下过夜，次日混合液离心后，将得到的沉淀溶解于100ml的去离子水，同时加入50ml的2％的氯化十六烷吡啶，震荡3小时，之后，收集沉淀并溶解于100ml的0.5M的NaCl溶液，再加2倍体积的乙醇，离心并收集沉淀，离心力为6000g/min；

(3)将收集的沉淀用乙醇洗脱,并溶于5ml的去离子水，真空干燥，得生物絮凝剂；

(b)利用热激转化法或电转化法将病原菌特异性质粒pNJR6转化进入大肠杆菌细胞，最低转化率为10％，作为致死质粒供体菌；

(c)向步骤(a)加入了生物絮凝剂溶液的脑膜脓毒性金黄杆菌的再生水中加入10³个/L致死质粒供体菌，并加入浓度为50-80mg/L纳米级氧化石墨烯，24小时后达到对脑膜脓毒性金黄杆菌致死率大于50％，36小时以后的致死率可达80％以上；

(d)60小时后向步骤(c)的再生水中加入浓度为3-5g/ml生物絮凝剂溶液，体积比为90：10，去除细胞裂解产生的蛋白质核酸和细胞内溶物。

2.根据权利要求1所述的处理含脑膜脓毒性金黄杆菌的再生水的方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌，其16SrDNA序列如SEQ ID No.1所述。

3.根据权利要求1所述的处理含脑膜脓毒性金黄杆菌的再生水的方法，其特征在于：步骤(1)中发酵培养pH7.0，培养温度为25-30℃，培养时间为80-100小时。

4.根据权利要求1所述的处理含脑膜脓毒性金黄杆菌的再生水的方法，其特征在于：步骤(c)中pH值为7。

5.根据权利要求1所述的处理含脑膜脓毒性金黄杆菌的再生水的方法，其特征在于：步骤(c)中纳米级氧化石墨烯的浓度为80mg/L。