[发明专利]一种林蛙卵蛋白水解物对罗伊氏乳杆菌冻干保护的方法在审
申请号: | 201910266347.3 | 申请日: | 2019-04-03 |
公开(公告)号: | CN109797125A | 公开(公告)日: | 2019-05-24 |
发明(设计)人: | 张铁华;赵禹彤;费付喜;李乐 | 申请(专利权)人: | 吉林大学 |
主分类号: | C12N1/20 | 分类号: | C12N1/20;C12N1/04;C12R1/225 |
代理公司: | 长春市恒誉专利代理事务所(普通合伙) 22212 | 代理人: | 李荣武 |
地址: | 130012 吉*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 罗伊氏乳杆菌 林蛙卵 蛋白水解物 冻干保护剂 冻干 混匀 菌体 猴头菇提取物 真空冷冻干燥 蛋白水解液 碱性蛋白酶 冻干菌粉 抗坏血酸 林蛙卵粉 制备菌体 存活率 保护剂 海藻糖 菌悬液 质量比 除菌 制备 配制 解脱 | ||
本发明公开了一种林蛙卵蛋白水解物对罗伊氏乳杆菌冻干保护的方法。本发明包括以下步骤:首先使用碱性蛋白酶酶解脱脂林蛙卵粉制备林蛙卵蛋白水解液,之后制备菌体的冻干保护剂,主要包括猴头菇提取物15%‑20%,林蛙卵蛋白水解物10%‑20%,海藻糖15%‑25%,抗坏血酸3%‑5%。将培养离心获得的罗伊氏乳杆菌菌体加入到配制好且除菌后的冻干保护剂中混匀,其中菌体与保护剂的体积质量比为1:1‑10,最终将混匀后的菌悬液真空冷冻干燥。使用该冻干保护剂,罗伊氏乳杆菌冻干菌粉的存活率在70%以上。
技术领域
本发明涉及微生物发酵领域,具体涉及一种林蛙卵蛋白水解物对罗伊氏乳杆菌冻干保护的方法。
背景技术
罗伊氏乳杆菌存在于大多数脊椎动物和哺乳动物的肠道中,可以定植于肠道内部抑制其他有害菌的生长。本专利选取的罗伊氏乳杆菌属于太空诱变菌株,经研究后表明该菌株的抗冻性以及贮藏过程中稳定性较差,但具有保护胃黏膜、调节肠道菌群以及抗炎抗过敏的作用,目前在婴幼儿和成人保健食品、功能性固体饮料以及营养食品中均有应用。
林蛙可以在寒冷冬天保持卵子的活性,表明林蛙卵具有一定的抗冻功能,同时也有研究表明林蛙卵蛋白具有抗疲劳的功能。对林蛙卵粉进行酶解制备林蛙卵蛋白水解物,可以起到对菌体保护和提高其营养价值的双重作用。猴头菇是一种药膳兼用菌,猴头菇多糖具有提高免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂等多种生理功能,对人体具有良好的保健功能。
目前主要通过真空冷冻干燥的方法制备乳酸菌菌粉,真空冷冻干燥技术可以降低酶的活性和菌体的死亡率,充分去除菌体中的水分便于菌粉的运输和保存。但冻干会破坏菌体的细胞膜和磷脂分子层从而导致菌体死亡。菌种的冻干保护剂可以降低冻干过程对菌体的伤害,通过与磷脂双分子层或者膜蛋白的结合弱化冰晶对菌体的破坏,也可以通过转变膜脂质等成分的相转变温度来抑制冰晶的形成。目前益生菌的适用的冻干保护剂主要有蛋白质类、糖类、醇类、氨基酸、抗坏血酸等,但目前还未能检索到使用林蛙卵蛋白水解物和真菌提取物作为保护剂的文献。本专利使用林蛙卵蛋白水解物和猴头菇提取物作为罗伊氏乳杆菌的冻干保护剂,对罗伊氏乳杆菌太空诱变菌株具有较好的保护作用,并同时提高了其在贮藏过程中的稳定性。
发明内容
本发明提供了一种林蛙卵蛋白水解物对罗伊氏乳杆菌冻干保护的方法。本发明能有效提高罗伊氏乳杆菌冻干后的存活率和贮藏稳定性。
本发明第一方面提供了一种林蛙卵蛋白水解物对罗伊氏乳杆菌冻干保护的方法,主要包括以下组分:猴头菇提取物,林蛙卵蛋白水解物,海藻糖,抗坏血酸。
在本发明的一实施方案中,所述的罗伊氏乳杆菌冻干保护剂包括以下重量百分比的成分:猴头菇提取物15%-20%,林蛙卵蛋白水解物10%-20%,海藻糖15%-25%,抗坏血酸3%-5%。
优选的所述的罗伊氏乳杆菌冻干保护剂,包括以下组分:猴头菇提取物20%,林蛙卵蛋白水解物15%,海藻糖20%,抗坏血酸3%。
本发明第二方面提供了一种罗伊氏乳杆菌冻干保护剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)称取一定量的脱脂林蛙卵粉,按料液比1:5加入蒸馏水,使用1mol/L的NaOH调节pH至9后加入2%的碱性蛋白酶,置于58℃的水浴锅搅拌4h。酶解结束后升温至100℃灭酶5min,过滤残渣得到滤液,用1mol/L的HCl调节滤液pH至中性,7000r/min10min对滤液进行离心分离,离心后的上清液置于真空冷冻干燥机中干燥24h得到林蛙卵蛋白水解物。
(2)按照配比称取各组分配制冻干保护剂
将称好的猴头菇提取物、林蛙卵蛋白水解物、海藻糖、抗坏血酸充分溶解于pH=6.5的磷酸盐缓冲液中,使用微滤膜除菌,备用。
在本发明的一实施方案中,所述冻干保护制备方法步骤中,pH=6.5的磷酸盐缓冲液为4℃。
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