[发明专利]一种蒙椴种苗的组织培养方法

说明书

本发明提供了一种蒙椴种苗的组织培养方法，包括以下步骤：(1)取蒙椴种子进行灭菌处理；(2)将灭菌后的蒙椴种子去除种皮，接种于诱导培养基中进行诱导培养，得到不定芽；(3)将所述不定芽接种于继代培养基中进行继代培养，得到继代苗；(4)将所述继代苗接种于生根培养基中进行生根培养，得到生根苗。在本发明的实施例中，增殖期以3.8倍速率增殖，生根率为86％。该方法可一次性培养大量的蒙椴再生苗，解决种子休眠和实生苗生长缓慢的问题，避免了扦插方式而产生的病虫害传播。该方法可明显提高蒙椴繁育系数，缩短了繁育周期。

技术领域

本发明涉及林木繁育技术领域，具体涉及一种蒙椴种苗的组织培养方法。

背景技术

蒙椴(Tilia mongolica)，为山地中生阳性树，在夏绿阔叶林的桦杨林或山地杂木林中为主要伴生树种，局部地段可成为优势种，形成小片椴树林。草原带的山地也有散生。该树种广泛分布于蒙古以及中国大陆的山西、河北、辽宁、内蒙古、河南等地，已由人工引种栽培。蒙椴木材轻软，可作家具、炊具用材；花可入药，种子榨油供工业用，树皮纤维可制绳。蒙椴是理想的生态经济型树种，对北方地区的水土保持及生态修复可以起到十分积极的作用。

蒙椴休眠性特别强，种子发芽率极低，且常规播种繁殖的苗木在幼年期生长缓慢，株高1米的幼苗通常需生长5～10年，导致育苗周期长、繁殖系数低。扦插繁殖也不易生根，易积累病虫害，而且对母树的数量要求以及树型的破坏性大，极大地制约了蒙椴的优良种苗的推广种植。

植物组织培养可以短时间内大量生产苗木，且其生产不受时间、季节、环境等因素的影响。随着技术的发展，组织培养的成本降低，繁殖数不断增加，对蒙椴在市场上的推广应用及新品种的选育有很大的推动作用。然而，目前没有针对蒙椴种苗的相应组织培养方法。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蒙椴种苗的组织培养方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

本发明涉及一种蒙椴种苗的组织培养方法，包括以下步骤：

(1)取蒙椴种子进行灭菌处理；

(2)将灭菌后的蒙椴种子去除种皮，接种于诱导培养基中进行诱导培养，得到不定芽；

(3)将所述不定芽接种于继代培养基中进行继代培养，得到继代苗；

(4)将所述继代苗接种于生根培养基中进行生根培养，得到生根苗。

优选地，步骤(1)中，灭菌前对所述蒙椴种子进行以下操作：

[1]将蒙椴种子与细砂按1:3的重量比混合，揉搓至种子表面粗糙，将种子洗净后浸泡2～4d；

[2]将浸泡后的种子滤干，加入浓硫酸浸泡2～4min后取出洗净，并用水浸泡过夜，该步骤进行两次。

优选地，步骤(1)中，所述灭菌处理为将所述种子依次使用酒精溶液和次氯酸钠溶液浸泡后，然后用无菌水冲洗。

优选地，步骤(1)中，所述酒精溶液的体积分数为75％，所述次氯酸钠溶液的质量浓度为2％。

优选地，步骤(2)中，所述诱导培养基是以WPM培养基为基础，并添加2,4-D、GA₃、蔗糖和琼脂得到，所述诱导培养基中2,4-D的浓度为1.0mg/L，GA₃的浓度为1.0mg/L，蔗糖的浓度为30g/L，琼脂的浓度为5.5g/L，且所述诱导培养基的pH值为5.8～6.0。

优选地，步骤(2)中，所述诱导培养为将灭菌后的蒙椴种子剥除种皮后接种于诱导培养基中，在温度为25±2℃下暗培养15～25天，直至种子萌发；待幼苗高度为3～5cm时改为弱光培养，待高度为7～10cm时得到不定芽。