[发明专利]一种从青稞秸秆中提取化感物质Salcolin A的制备方法

说明书

本发明公开了一种从青稞秸秆中提取化感物质Salcolin A的制备方法。包括包括材料粉碎、纯水超声波提取、富集去糖、HPLC制备、重结晶。采用纯水超声波提取法，避免了有机溶剂提取所造成的毒害和污染；富集去糖工艺采用提取浓缩液上D101大孔树脂，先用水洗脱，再用甲醇洗脱，收集醇洗脱液处理。通过该处理可有效除去提取物中的糖份大分子等杂质，提高了分离效率并减少了原材料投入。HPLC制备可缩短极大分离时间，可重复性强、减少人力物力的投入。本发明提供的制备方法获得的Salcolin A纯度可达95％以上，且操作简单，可极大的节约有毒溶剂的使用量，节省人力，节约时间。

技术领域

本发明属于植物化感活性物质技术领域，具体涉及一种从青稞秸秆中提取化感物质Salcolin A的制备方法。

背景技术

农田杂草是农业生产中的重要问题之一，其与作物争夺光、水、肥等资源而成为影响作物产量和品质的重要因子，给农业生产造成巨大损失。长期以来主要采用化学除草的手段来控制杂草的危害，使用除草剂不仅污染环境，而且杂草易产生抗药性，引发的食品安全、公共卫生、自然环境及杂草抗(耐)药性等方面的不利影响已日益引起人们的关注。植物化感作用(Allelopathy)是指一种植物向环境释放特定的化学物质(化感物质，Allelochemical)而影响周围其它植物的生长和发育的生态学现象。利用植物间的化感作用可以通过向环境中释放化感物质并与杂草竞争生存环境，进而对杂草种子的萌发和生长产生抑制作用，利用化感作用控制杂草不会带来诸如农药残留等的环境问题。为了保护人类生存的环境和农业的可持续发展，化学除草剂的研制与使用将严格受到环境和生态的制约。利用天然产物开发新的除草剂，已表现出强大的生命力，天然产物除草剂逐渐受到人们的重视，植物化感物质是寻找新型生物源除草剂先导化合物的重要途径。

青稞(hullessbarley)是青藏高原的特色作物，是禾本科大麦属的一种禾谷类作物，因其内外颖壳分离，籽粒裸露，故又称裸大麦。申请人前期通过大量的研究工作在国内外首次报导了青稞具有化感作用、青稞的主要化感物质、青稞化感作用的表现形式等，同时证实Salcolin A(tricin 4'-O-(threo-β-guaiacylglyceryl)ether)是主要的青稞抑草化感物质，通过生物活性测试，在供试浓度为100μg/mL时，其对受体野燕麦根长化感指数为0.63。另外Salcolin A对铜绿微囊藻生长有抑制作用，半抑制浓度(5d)分别为6.02×10^-5mol l^-1。Salcolin A结构新颖、异构体较多、生物活性多样，在科学研究及农业应用领域有广阔前景。但是，其化学结构复杂、手性碳多，难以化学合成，目前其来源仍然依赖于从植物中分离获得。

现在关于Salcolin A的提取纯化方法非常少，以青稞为原料来源的提取纯化方法基本空白。目前方法也仅仅是实验室微量提取分离，无标准操作流程，获取量多在十几毫克且无保证。具体方法是：材料粉碎——95％工业甲醇回流提取——提取液浓缩——有机溶剂萃取(或有机溶剂回流提取)——硅胶柱层析(正相柱和反相柱)——HPLC制备——重结晶。在有机溶剂萃取(或有机溶剂回流提取)工艺中，通常使用石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇等有毒有机溶剂进行萃取或提取，在硅胶柱层析工艺中，最常用的是采用湿柱法进行分离，即用经有机溶剂浸泡后的硅胶粉填充层析柱，将样品加到填充层析柱上部，再用不同有机溶剂进行洗脱，分部收集洗脱液，如此反复层析，最后用HPLC制备，重结晶直至获得纯品。整个工艺较繁琐、耗时，制备人员与有毒溶剂接触的时间长，严重损害制备人员的身体健康，产生大量有毒有害的有机溶剂，对环境危害严重。

D101大孔吸附树脂是一种具有多孔海绵状结构人工合成的聚合物吸附剂，依靠树脂骨架和被吸附的分子之间的范德华力，通过树脂巨大的比表面积进行物理吸附而达到从水溶液中分离提取水溶性较差的有机物质的目的。D101树脂是一种非极性吸附剂，一般用于中草药中皂甙类物质的提取与分离，具有操作简便、成本较低、树脂可反复使用等优点。

发明内容