[发明专利]一种特异性结合四种血清型登革病毒的人源抗体

说明书

本发明公开了一种特异性结合四种血清型登革病毒的人源抗体。本发明所提供的人源抗体，其重链可变区中HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.1自N端起第26‑33位、第51‑58位、第97‑121位所示，轻链可变区中LCDR1、LCDR2和LHCDR3的氨基酸序列依次如SEQ ID No.2自N端起第27‑32位、第50‑52位、第89‑97位所示。本发明所提供的抗体可有效预防四种血清型DENV的感染，治疗致死剂量DENV‑1和DENV‑2的感染。本发明对于开发预防及治疗登革病毒感染的药物具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种特异性结合四种血清型登革病毒的人源抗体。

背景技术

登革病毒(Dengue virus,DENV)属于黄病毒科黄病毒属，是有包膜的单正链RNA病毒，根据其包膜的抗原性不同，分为四种血清型(DENV I-IV)。登革病毒主要以埃及伊蚊和白纹伊蚊为传播媒介，广泛流行于热带和亚热带地区。人类首次感染登革病毒会引起登革热(Classic Dengue Fever,DF)，是一种自限性发热性疾病，同时登革病毒可以激发良好的细胞免疫和体液免疫，对感染的该亚型可提供终身的免疫力。但是当再次感染其他亚型的登革病毒时，首次感染产生的抗体会携带病毒攻击靶细胞，造成病毒大量的增殖，从而引发严重的登革出血热(Dengue Hemorrhagic Fever，DHF)和登革休克综合征(Dengue ShockSyndrome，DSS)甚至死亡，即抗体依赖增强(Antibody dependent enhancement,ADE)。世界上约有半数的人口生活在登革热疫区，每年有超过5000万的感染病例，其中有50万人发展为严重的DHF和DSS。但是，由于ADE现象的存在，临床上缺乏预防和治疗DENV感染的有效疫苗和药物，主要以对症支持治疗为主。

免疫球蛋白是治疗病毒感染类疾病的重要手段，不仅能中和病毒，还能通过补体依赖的细胞毒作用(complement dependent cytotoxicity,CDC)和抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(antibody dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC)激活体内免疫系统清除病毒。大量体内、外实验证明：中和抗体能有效阻止DENV的感染，不仅能发挥病毒感染前的预防作用，而且在病毒感染后的一段时期内，依然能发挥治疗病毒感染的作用。基于临床上针对DENV感染无有效防治手段的现状，以及近年来单克隆抗体技术在人源化、规模化培养制备等方面均取得的巨大进步，登革病毒的治疗性抗体研究也得到了长足的发展。

DENV的E蛋白是感染性病毒粒子表面暴露最充分的蛋白，也是中和抗体的主要靶点。目前全球报道的DENV中和抗体表位也多与E蛋白有关：(1)识别DENV EDⅡ：FL loop对应的交叉中和性抗体(E53)大都中和效率低且易产生ADE效应；针对BC loop的交叉中和抗体(1C19)不仅能高效中和DENV且还能与低效抗FL抗体竞争结合。(2)识别DENV EDⅢ：AB loop对应交叉中和抗体一般具弱中和性，EF loop附近形成的单抗(2B11A35/2D73A7)具高效交叉中和能力，A strand表位(单抗，DB32-6)具有高效中和活性；(3)识别E蛋白二聚体依赖性表位(E-dimer-dependent epitope，EDE)：单抗(EDE1/EDE2)是一类新型高效广谱的人源中和抗体。此外，在抗体来源方面，大多数中和抗体为鼠源，少量人源化及人源抗体。人源化抗体与鼠源抗体相比具有以下特点：(1)免疫原性低于鼠源抗体；(2)亲和力弱于鼠源抗体，特异性优于鼠源抗体；(3)人源化抗体Fc段能够诱发机体的效应功能；(4)在体内半衰期长；(5)价格仍较昂贵。但人源化抗体仍含有10％～30％的鼠源蛋白，在临床应用时仍存在免疫排斥反应的潜在威胁，因而全人源中和抗体是DENV治疗性抗体的重要研发目标之一。

基于临床需求，探索和研发登革病毒中和抗体具有重要的生物学和医学意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性结合四种血清型登革病毒的人源抗体。