[发明专利]烟草抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用

权利要求书

1.一种烟草抗肿瘤活性组分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)预处理：对烟草原料进行烘干处理，以及将烘干处理后的烟草原料进行超微粉碎处理，得到烟草超微粉；

(2)常温水提：在烟草超微粉中加入提取溶剂，在常温条件下进行提取操作；对提取操作后的烟草超微粉进行离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(2)中的提取溶剂为纯化水；

(3)高温水提：在步骤(2)中收集的沉淀物中加入提取溶剂，在90-100℃的提取温度下进行浓缩提取操作；对浓缩提取操作后得到的浓缩提取液进行降温处理、离心处理，并收集离心处理后的沉淀物；步骤(3)中的提取溶剂为纯化水；

(4)甲醇提取：在步骤(3)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干处理，得到甲醇提取上清浓缩浸膏(TMS)；步骤(4)中的提取溶剂为85-100％的甲醇；

(5)丙酮提取：在步骤(4)中得到的沉淀物中加入提取溶剂，在0-4℃的提取温度下进行浸提提取操作，对浸渍提取物进行离心处理，并收集离心处理后的上清，将收集的上清进行旋转蒸发浓缩烘干/低温冷冻干燥处理，得到丙酮提取上清浓缩浸膏/丙酮提取上清冻干粉(TAS)；步骤(5)中的提取溶剂为85-100％的丙酮；

(6)色谱分离及组分活性分析：

(a)取步骤(5)中得到的丙酮提取上清浓缩浸膏/丙酮提取上清冻干粉(TAS)用60％甲醇-水溶液进行溶解，得到浓度为0.25g/mL样品，用制备液相进行分离，洗脱方式为：5％甲醇-水溶液等度洗脱，15％甲醇-水溶液等度洗脱，20％甲醇-水溶液等度洗脱，30％甲醇-水溶液等度洗脱，40％甲醇-水溶液等度洗脱，50％甲醇-水溶液等度洗脱，55％甲醇-水溶液等度洗脱，65％甲醇-水溶液等度洗脱，100％甲醇等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性组分12进行旋蒸浓缩干燥；

(b)取活性组分12用无水乙醇进行溶解，得到浓度为0.25g/mL样品，用制备液相进行分离，洗脱方式为100％正己烷等度洗脱，85％正己烷-乙醇溶液等度洗脱，70％正己烷-乙醇溶液等度洗脱，60％正己烷-乙醇溶液等度洗脱，检测波长为260nm，得到各组分经体外抗肿瘤活性筛选后，选取活性组分1(以下均称为TA-150-12-1)进行旋蒸浓缩干燥；

和/或，步骤(6)中得到活性组分TA-150-12-1进行质谱分析。色谱条件：5％-100％甲醇-水溶液10min；100％甲醇5min；质谱条件：正离子模式一级质谱；参比离子质荷比：121.050873和922.009798。

2.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗肿瘤活性组分的方法，其特征在于：所述步骤(1)中的中的超微粉碎处理是将烘干处理后的烟草原料，使用50-80目筛网的粉碎机进行粉碎处理，并对粉碎处理后的烟草原料，使用超微粉碎机进行粉碎处理，得到所述烟草超微粉。

3.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗肿瘤活性组分的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的离心处理是指将降温处理后的所述浓缩提取液置于离心瓶中，离心温度为8-12℃，离心时间为0.5-1.5h，转速为3000-6000rpm/min。

4.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗肿瘤活性组分的方法，其特征在于：所述步骤(4)中加入提取溶剂的质量是沉淀物的质量的1.5-2.5倍。

5.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗肿瘤活性组分的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的浸渍提取操作是指每隔0.5h搅拌一次，提取时间为12-24h。

6.根据权利要求1所述的从烟草中提取抗肿瘤活性组分的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的浓缩烘干处理的温度为60-70℃。