[发明专利]一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条

说明书

本发明属于疾病检测、免疫传感技术领域，涉及一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条。本发明所述的试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、结合垫、吸水纸以及样品垫；所述硝酸纤维素膜，粘结在所述底板的中部；所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有结合垫，另一端粘贴有吸水纸，所述结合垫上粘贴有样品垫；所述硝酸纤维素膜上设有测试线和控制线，所述测试线上喷洒有骨桥蛋白单克隆抗体，所述控制线上喷洒有ssDNA，所述ssDNA是与骨桥蛋白适配体互补的单链DNA；所述结合垫上固定纳米金标记的链霉亲和素。本发明所述的一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条能够快速、简单地检测骨桥蛋白，且具有灵敏度高，特异性强的优点。

技术领域

本发明属于疾病检测、免疫传感技术领域，具体涉及一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条。

背景技术

骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)是一种磷酸化的酸性分泌型蛋白，具有多种生物学功能，广泛存在于各种组织和体液中，通过一定的信号传导途径参与细胞行为，如调节细胞黏附、迁移和信号传导等行为，且能够促进细胞的趋化、黏附和迁移。近几年的研究发现OPN在正常组织中呈现很低的表达水平，而在恶性肿瘤(乳腺癌、卵巢癌和结肠直肠癌等)中呈现高表达水平，且与肿瘤的侵袭、转移等恶性行为密切相关。因此，对骨桥蛋白进行检测在肿瘤预防和肿瘤监测方面具有重要意义。

骨桥蛋白的传统检测方法需要依靠大型仪器，尽管检测结果精准可靠、灵敏度高，但是存在仪器设备昂贵、耗时长、成本高，并且需要专业技术人员，难以实时快速检测的缺点。因此，开发出快捷、灵敏、精确、高效和低成本的检测手段显得尤为重要。

侧流免疫层析技术因其简单、快速、成本低等优点，近年来受到广泛关注。本发明设计了一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条，检测时，向样品垫上滴加生物素适配体化的待测骨桥蛋白溶液样品，5min可观察到实验结果。

发明内容

为了克服上述现有技术中存在的不足，提供一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条。

为了解决上述技术问题，本发明采取了如下技术措施：

首先，制备纳米金-链霉亲和素(AuNP-SA)探针，其方法包括以下步骤：

(1)制备纳米金AuNP溶液：在250mL的圆底烧瓶中加入100mL0.01％的氯金酸溶液，磁力搅拌加热至沸腾；然后向上述溶液中加入5mL1％柠檬酸钠，溶液变为酒红色后，继续煮沸10min，停止加热，继续搅拌15min，得到纳米金AuNP(胶体金)溶液，4℃避光保存。

(2)向1mL的胶体金溶液中加入0.1molL^-1K₂CO₃(5μL)混匀，5min后加入8μg的SA(链霉亲和素)，室温震荡30min。加入10％BSA(100μL)封闭30min，4℃离心(10×10³rpm，10min)，得到AuNP-SA(纳米金-链霉亲和素)探针。弃清液，用100μL硼酸缓冲液(0.2mol L^-1，pH9.0)重悬AuNP-SA探针。

其次，一种检测骨桥蛋白的纳米金标记侧流免疫层析试纸条包括底板、硝酸纤维素膜、结合垫、吸水纸以及样品垫；所述硝酸纤维素膜，粘结在所述底板的中部；所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有结合垫，另一端粘贴有吸水纸，所述结合垫上粘贴有样品垫。所述硝酸纤维素膜上设有测试线和控制线，所述测试线上是由骨桥蛋白的单克隆抗体(0.67mg mL^-1，30μL)喷洒到硝酸纤维素膜上形成的；所述控制线是由ssDNA(0.67mg mL^-1，30μL)喷洒到硝酸纤维素膜上形成的，所述ssDNA是与骨桥蛋白适配体互补的单链DNA。