[发明专利]抑制AFAP1-AS1表达的干扰RNA及在增加乳腺癌放疗敏感性中的应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种抑制AFAP1‑AS1表达的干扰RNA及在增加乳腺癌放疗敏感性中的应用。本发明通过实验发现长链非编码RNA(lncRNA)AFAP1‑AS1在放射抵抗的乳腺癌细胞中高表达，本发明所提供的干扰RNA可以显著抑制lncRNA AFAP1‑AS1在乳腺癌细胞中的表达，可以增加乳腺癌细胞的放疗敏感性，对于乳腺癌的治疗有着非常积极的效果。本发明还公开了一种用于携带上述的抑制AFAP1‑AS1表达的干扰RNA的载体，可通过采用还原响应的高分子聚合物有助于消耗放疗抵抗肿瘤细胞中过量的GSH，打破胞内氧化还原平衡，提高胞内反应活性氧的比率，进一步提高肿瘤细胞的放疗敏感性。联合放疗和基因治疗，对于肿瘤的治疗效果更明显。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种抑制AFAP1-AS1表达的干扰RNA及在增加乳腺癌放疗敏感性中的应用。

背景技术

癌症发病率呈逐年上升趋势，目前已成为威胁人类健康最严重的疾病之一，其中全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。美国8名妇女一生中就会有1人患乳腺癌；中国虽然不是乳腺癌的高发国家，但也不宜乐观，近年我国乳腺癌发病率的增长速度却高出高发国家1～2个百分点。据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的 2009年乳腺癌发病数据显示：全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位，女性乳腺癌发病率(粗率)全国合计为42.55/10万，城市为51.91/10万，农村为23.12/10万。

手术、化疗和放射治疗(简称放疗)是常规的癌症治疗方法。几乎一半的癌症患者都接受放疗。在治愈的癌症患者中，有将近40％患者都受益于放疗。大部分癌症患者在治疗之初对放疗非常敏感，但是患者在治疗过程中逐步产生获得性放疗抵抗，进而促进了肿瘤复发和侵袭转移，导致治疗失败。虽然增加放疗剂量可以促进对肿瘤细胞的杀伤，但是放射线不可避免对正常细胞和组织产生严重的毒副作用。

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术近年来发展迅速，可以用于多种疾病的治疗。和小分子靶向药物相比，siRNA对靶点的选择性会更好，能够特异性结合靶基因并下调靶基因表达，而且不会影响细胞中其它正常基因的表达。但是RNAi技术在临床转化时最大难题是缺少低毒高效的载体将siRNA输送到病灶部位和细胞内。对于基于RNAi技术的癌症治疗， siRNA在输送过程需要解决一系列生理屏障，例如如何靶向肿瘤细胞、穿透肿瘤组织和细胞膜、从内涵体高效逃逸以及在细胞质内有效释放siRNA等。

传统的病毒载体如腺病毒和逆转录病毒传递siRNA虽然可以克服上述各种生理屏障，但具有制备困难、siRNA容量小、靶向特异性差、免疫原性强等缺点。由于高分子纳米材料具有相容性好、携带RNA容量大、低免疫原性、易于功能一体化、容易大规模制备等优点，高分子材料被广泛应用于siRNA传递和肿瘤治疗。尤为重要的是，相对于正常组织，实体瘤组织中血管丰富、血管壁间隙较宽、结构完整性差，淋巴回流缺失，使得纳米尺寸的颗粒能够更趋向于富集和滞留在肿瘤组织(即肿瘤组织的高通透性和滞留效应，又称EPR效应)。因此，构建新型高分子纳米材料并用于siRNA的高效传递一直是国内外研究热点。尤其是近几年来，基于肿瘤特殊的微环境如弱酸及乏氧环境、特定酶过度表达等，国内外研究者致力于开发出肿瘤微环境响应的高分子纳米载体材料并用于siRNA高效传递。目前已经报道的肿瘤微环境响应纳米载体包括酸响应、乏氧响应、酶响应等高分子纳米载体。这些纳米载体能在血液循环和正常生理组织中稳定存在；到达肿瘤部位后，能够对肿瘤细胞内外微环境做出快速响应，加快siRNA的释放效率，显著提高基因治疗效果并减轻毒副作用。