[发明专利]一种人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法

权利要求书

1.一种人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，将Luciferase-GFP基因转导进人脑胶质瘤，并筛选出感染后的人脑胶质瘤阳性细胞，配制形成细胞悬液；

步骤2，小鼠麻醉后将其头部固定，将消毒后的进样针吸取细胞悬液后置于小鼠颅骨上方手术区域；

步骤3，对小鼠颅骨手术区域钻孔后形成注射孔；

步骤4，移动进样针至注射孔中，并深入至脑组织中缓慢注入细胞悬液；

步骤5，注射完细胞悬液后提出进样针，将伤口消毒后粘合；

步骤6，待细胞悬液注入一周后对肿瘤部位进行显像观察，并对所构建的人脑胶质瘤原位模型进行评估。

2.根据权利要求1所述的人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，其特征在于，将Luciferase-GFP基因转导进人脑胶质瘤之前需要对小鼠禁食不禁水，在740nm的红外光下检测小鼠体内食物状况，直至小鼠体内食物完全排空为止。

3.根据权利要求1所述的人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，其特征在于，所述步骤1中制备GFP人脑胶质瘤阳性细胞的具体方法是：

步骤1.1、将人脑胶质瘤细胞接种于细胞培养皿中，5x10⁵个/皿；

步骤1.2、采用高唐4DMEM培养基(含10％的胎牛血清)培养M-PG-13-GL细胞，收集产生的病毒5ml，采用2000g离心5min，留上清液，并在上清液中加入基因转染增强剂，吸弃培养基后，加入上述所产生的病毒5ml感染人脑胶质瘤细胞；

步骤1.3、重复上述过程制作U87-GL细胞，且连续感染人脑胶质瘤细胞至少3天；

步骤1.4、相应培养基扩增已转入GFP的人脑胶质瘤细胞；

步骤1.5、采用流式分选出阳性细胞，制得GFP人脑胶质瘤细胞。

4.根据权利要求1所述的人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，其特征在于，所述步骤2中注入麻醉试剂将小鼠麻醉；在小鼠头部所设定的手术区域进行备皮、消毒，并自眼内眦连线中点向后切开作为手术区域；经小鼠颅定位仪将小鼠的头部固定；消毒冲洗配套的进样针，吸取配制好的细胞悬液后将进样针固定在小鼠颅定位仪上。

5.根据权利要求1所述的人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，其特征在于，所述步骤3中将吸取细胞悬液的进样针对准小鼠前囟，向后向右各移动2cm，通过钻孔工具对进样针所对颅骨表面进行钻孔，钻穿颅骨后形成注射孔。

6.根据权利要求1所述的人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，其特征在于，所述步骤4中将进样针深入脑组织3.5cm，再提起0.5cm，缓慢注入含有10⁵-10⁶个人脑胶质瘤细胞的细胞悬液，注入时间为3-8min。

7.根据权利要求1所述的人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，其特征在于，所述步骤5中注射完细胞悬液后需静置4-6min，然后缓慢提出进样针，对伤口进行消毒、粘合。

8.根据权利要求1所述的人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，其特征在于，所述步骤6中对所构建模型进行评估的方法是：在小鼠腹腔注射D-虫荧光素(D-Luciferin)溶液，经反应3-8分钟后，将小鼠置于活体成像系统内进行荧光拍照显色，并计算荧光值，当所测荧光值大于1×10⁵p/sec/cm²/sr时，所构建的人脑胶质瘤小鼠原位模型造模成功。

9.根据权利要求8所述的人脑胶质瘤小鼠原位模型的构建方法，其特征在于，在小鼠腹腔注射D-虫荧光素(D-Luciferin)溶液150-250μL。