[发明专利]一种基于孔板技术的红曲霉分离纯化方法在审
| 申请号： | 201910116434.0 | 申请日： | 2019-02-15 |
| 公开（公告）号： | CN109593660A | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 倪莉;周康熙;刘志彬;张雯;张晨 | 申请（专利权）人： | 福州大学 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊;饶文君 |
| 地址： | 350108 福建省福州市闽*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 红曲霉 孔板 分离纯化 六孔板 工作效率 实验周期 形态各异 培养基 传统的 菌落 点样 复检 扩培 酸醇 摇瓶 杂菌 米粉 工作量 微生物 生长 | ||
1.一种基于孔板技术的红曲霉分离纯化方法，其特征在于：将0.5~2.0g待分离样品分别加至每孔装有20~30mL液体酸醇米粉培养基的深六孔板中进行红曲霉扩培，30℃、200r/min扩培3d后在无菌超净台内各取100uL样品在PDA上进行涂布，30℃培养5d后挑取形态各异的菌落在含有鉴定培养基的24孔板中进行点样复检，最后将复检后的红曲霉菌株在PDA斜面培养基上划线培养后4℃保藏。
2.根据权利要求1所述的一种基于孔板技术的红曲霉分离纯化方法，其特征在于：所述液体酸醇米粉培养基的具体配置方法为：无水葡萄糖5~15g、过40目的籼米粉15~30g、乳酸8~12mL，加去离子水定容至950mL，121℃灭菌20min；灭菌后再在无菌超净台中加入50mL无水乙醇，混匀，待用。
3.根据权利要求1所述的一种基于孔板技术的红曲霉分离纯化方法，其特征在于：所述PDA培养基的具体配置方法为：马铃薯削皮切块，取200g块状马铃薯加蒸馏水800mL沸水蒸煮20~30min，用八层纱布过滤残渣，取滤液加20g葡萄糖和17~20g琼脂，煮沸冷却后定容至1L,121℃20min灭菌。
4.根据权利要求1所述的一种基于孔板技术的红曲霉分离纯化方法，其特征在于：菌落的复检方法为：在24孔板中加入鉴定培养基，每孔1.5mL，24个孔共四行六列，一至四行培养基分别为CYA、G25N、MEA、PDA培养基。
5.根据权利要求4所述的一种基于孔板技术的红曲霉分离纯化方法，其特征在于：CYA培养基的配置方法为：硝酸钠3g、磷酸氢二钾1g、氯化钾0.5g、七水合硫酸镁0.5g、七水合硫酸亚铁0.01g、酵母提取粉5.0g、蔗糖30g、17~20g琼脂，定容至1L后121℃20min灭菌。
6.根据权利要求4所述的一种基于孔板技术的红曲霉分离纯化方法，其特征在于：G25N培养基的配置方法为：CYA培养基中加入25wt.%的甘油。
7.根据权利要求4所述的一种基于孔板技术的红曲霉分离纯化方法，其特征在于：MEA培养基的配置方法为：酵母提取粉20g、蛋白胨10g、葡萄糖20g、17~20g琼脂，定容至1L后121℃20min灭菌。
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