[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌及其分离方法

说明书

本发明公开了一种解淀粉芽孢杆菌，其微生物学分类命名为解淀粉芽孢杆菌GZU03，拉丁文学名：Bacillus amyloliquefaciens GZU03，已于2018年11月9日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2018762。本发明还公开了所述解淀粉芽孢杆菌GZU03的分离、培养方法。

技术领域

本发明属于微生物与烟草梗丝加工技术领域，具体地说涉及一种解淀粉芽孢杆菌GZU03及其应用。

背景技术

芽孢杆菌(Bacillussp.)是一类产芽孢的革兰氏阳性细菌，好氧或兼性厌氧生活，能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和抗有机溶剂的内生孢子，所产芽孢可制成粉剂、可湿性粉剂等各种剂型，且与化学农药混用后不失活，是理想的生防菌筛选对象。解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是芽孢杆菌的一种，解淀粉芽孢杆菌不仅是理想的生防菌筛选对象，其同样具有较强的代谢产物产生能力，其代谢过程中往往会产生功效性成分，如产生淀粉酶、蛋白酶、尿素酶等多种酶，因此解淀粉芽孢杆菌具有较好的应用前景。

发明内容

本发明第一方面提供一种解淀粉芽孢杆菌，其微生物学分类命名为解淀粉芽孢杆菌GZU03，拉丁文学名：Bacillus amyloliquefaciens GZU03，已于2018年 11月9日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC M 2018762，保藏地址为中国武汉武汉大学湖北省武汉市武昌区珞珈山路16号。

其中，所述解淀粉芽孢杆菌GZU03菌落及显微镜形态观察：图1为解淀粉芽孢杆菌GZU03的显微镜(1000X)观察照，菌株革兰氏染色菌体为紫色，为革兰氏阳性菌。图2为解淀粉芽孢杆菌GZU03的平板菌落形态，在酪蛋白平板上均能产生水解圈且形成圆形、低凹起、有粘性的小菌落，其颜色呈乳白色或淡黄色，边缘较为规则，无光泽，稍隆起，不透明，菌落直径2.0mm～3.0mm。

其中，对所述解淀粉芽孢杆菌GZU03的形态和生理生化特征进行鉴定，所述解淀粉芽孢杆菌GZU03细胞呈杆状，单个、成对或链状排列，芽孢中生或近中生，初步判断为芽孢杆菌属。所述解淀粉芽孢杆菌GZU03的全部16S rRNA 序列如序列表所示，将该序列表提交到NCBI，通过Blast在线程序在GenBank 数据库中检索与已刊登的16S rRNA序列同源性进行比较进一步确定其为解淀粉芽孢杆菌。

本发明第二方面提供一种分离和培养所述的解淀粉芽孢杆菌GZU03的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)选取豆豉样品，利用初筛培养基分离筛选出菌落；

所述初筛培养基的配制：3-10g酪蛋白，1-5g葡萄糖，1-5g酵母膏，1-5g K₂HPO₄，0.5-2.5g KH₂PO₄，0.1-0.5g MgSO₄，蒸馏水1000mL，pH为7.0～7.2；

(2)选取步骤(1)中所述菌落，利用复筛平板培养基分离筛选出酪蛋白水解圈大的菌落，得到产蛋白酶菌落；

所述复筛平板培养基的配制：K₂HPO₄5.0g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，(NH₄)₂SO₄ 2.0g，CaCl₂0.1g，NaCl 5.0g，琼脂粉20.0g，酪蛋白5.0g，牛肉膏5.0g，蒸馏水 1000mL，pH为7.0；

(3)选取步骤(2)中所述产蛋白酶菌落，利用LB培养基在37℃条件下发酵培养所述产蛋白酶菌落48h，得上清液；

所述LB培养基的配制：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl10g，蒸馏水 1000mL，pH为7.0；