[发明专利]一种戊肝IgA抗体的检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种戊肝IgA抗体的检测方法及试剂盒，解决了现有技术中尚未有戊肝IgA抗体检测试剂盒的问题。本发明的检测方法，包括以下步骤：抗原包被；封闭；第一步温育反应；第二步温育反应：向反应板的每个微孔中加入生物素标记的羊抗人IgA多克隆抗体和链霉亲和素标记的吖啶酯，经孵育操作后用洗涤缓冲液洗涤；化学发光测定。本发明的试剂盒，包括包被反应板、标记物、信号生成物、阴性对照、阳性对照。本发明设计科学，方法简单，通过引入生物素链霉亲和素信号放大系统，使用吖啶酯类化学发光物质，可有效增强免疫复合物与发光物质结合，极大地提高了灵敏度。

技术领域

本发明属于临床检测分析方法技术领域，具体涉及一种戊肝IgA抗体的检测方法及试剂盒。

背景技术

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)引起的一种自限性的感染性急性肝炎。经粪、口途径传播的急性肠胃道传染病，主要流行于亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家和地区。临床表现与甲型病毒性肝炎类似，但容易出现黄疸，病情较重，病程较长，病死率1％～4％，对孕妇、老年人和慢性肝炎患者的危害尤其严重。戊型肝炎多发生于发展中国家，据世界卫生组织(WHO)报道，全球每年大约有2000万人感染戊型肝炎，约350多万急性戊肝病例，5.66万死亡。我国是戊型肝炎高流行区，自1997年国家传染病疫情报告系统开始分型报告戊肝，已报道10余起暴发流行。随着国内卫生条件的改善和人民生活水平的提高，现主要以散发及局部暴发为主。由于猪是基因三型和四型HEV的主要宿主，猪源性的HEV也可以传染给人，因此戊型肝炎也是人畜共患疾病。事实上目前国内散发戊肝病例大多是动物源性感染。

近年来，越来越多的报道显示HEV可以通过输血进行传播，且普通人群和献血者中HEV的血清学流行率出现上升趋势。英国，美国，西班牙地区献血者HEV血清学流行率达10-20％之间在，高流行区如韩国，荷兰、法国、意大利阿布鲁佐地区、日本等HEV血清学流行率高达20％以上，我国已有报道的江苏和浙江地区HEV血清学流行率接近40％。HEV感染正成为危害大众健康的重要问题之一。

HEV是无包膜单股正链RNA病毒，病毒颗粒直径约27～34nm。基因组长约7.5kB，由5′非编码区、编码区和3′非编码区组成。编码区包括3个开放读码框架(ORF)。ORF1位于基因组的5′端，长5，079bp，为非结构区基因，编码病毒复制所需要的RNA聚合酶、蛋白酶和解旋酶等；ORF2及ORF3位于基因组的3′端，ORF2长1，980bp，编码病毒的结构蛋白；ORF3长369bp，含有可被中和抗体所识别的抗原表位。随着戊型肝炎病毒分子克隆技术的成功建立，以重组蛋白作为抗原来检测HEV抗体的技术正在逐步完善，同时HEV的生物学性状也在进一步了解中。

吖啶酯类化合物作为一种常用的化学发光试剂，具有高灵敏度、易标记蛋白、多肽和小分子上的优点；无需催化过程，也不需要增强剂，从而降低发光背景值，提高信噪比，减少干扰，是化学发光免疫分析的理想发光底物。目前已临床用于多种病毒抗原抗体检测项目中。国内外尚未有报道以链霉亲和素标记到吖啶酯类化合物上间接法测定戊型肝炎病毒IgA抗体的技术。目前市场上尚无商品化戊型肝炎病毒IgA抗体检测试剂盒。因此，提供一种灵敏度高，特异性好的戊肝IgA抗体的检测方法，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的之一在于，提供一种灵敏度高，特异性好的戊肝IgA抗体化学发光检测方法。

本发明的目的之二在于，提供一种戊肝IgA抗体的检测试剂盒。

本发明采用的技术方案如下：

本发明所述的一种戊肝IgA抗体的检测方法，包括以下步骤：

步骤1.抗原包被：将HEV基因重组抗原溶解于包被缓冲液后，再将反应板置于该包被缓冲液中，经孵育操作后用洗涤缓冲液洗涤；

步骤2.封闭：将经步骤1处理后的反应板用封闭缓冲液封闭，经孵育操作后用洗涤缓冲液洗涤，而后干燥；