[发明专利]miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞、其治疗制剂、制备方法和应用

说明书

本发明miR‑140‑5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞、其治疗制剂、制备方法和应用，属于生物医药技术领域。miR‑140‑5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞的制备包括(1)获取原代人脐带间充质干细胞；(2)原代人脐带间充质干细胞的传代培养；(3)miR‑140‑5p过表达慢病毒的构建；(4)miR‑140‑5p过表达慢病毒转染人脐带间充质干细胞，并筛选出稳转细胞系。所述治疗制剂的制备还包括取10^7个miR‑140‑5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞与间充质干细胞培养液进行充分混合后得到注射剂。本发明具有对骨关节炎的症状缓解和软骨缺损的修复均有良好效果的优点。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及骨关节炎治疗注射剂制备技术领域，具体涉及miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞、其治疗制剂、制备方法和应用。

背景技术

骨关节炎是一种常见的关节退行性疾病，在老年人中有极高的发病率。由于关节软骨自我修复能力弱，目前临床治疗软骨缺损的方法有限且效果并不理想。

发明内容

人脐带来源间充质干细胞与其他来源的间充质干细胞相比，具有低免疫原性，是同种异体细胞治疗的理想干细胞来源。

关节腔注射间充质干细胞治疗骨关节炎已有相关研究，证明可以部分缓解骨关节炎症状，但是对退变关节软骨的修复作用并没有确切证据。

同时，已有研究证明miR-140在软骨发育中具有重要作用，miR-140-5p的表达抑制可以减少骨髓间充质干细胞成软骨分化标志基因的表达。

本发明的目的在于公开了miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞。

本发明第二个目的在于公开了miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞的制备方法。

本发明第三个目的在于公开了miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞的应用。

本发明第四个目的在于公开了含有miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞的治疗制剂。

本发明第五个目的在于公开了含有miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞的治疗制剂的制备方法。

本发明第六个目的在于公开了含有miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞的治疗制剂的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞的制备方法，其中，所述制备方法包括下述步骤：

(1)、获取原代人脐带间充质干细胞；

(2)、原代人脐带间充质干细胞的传代培养；

(3)、miR-140-5p过表达慢病毒的构建；

(4)、miR-140-5p过表达慢病毒转染人脐带间充质干细胞，并筛选出稳转细胞系，得到miR-140-5p过表达修饰的人脐带间充质干细胞。

上述技术方案所述的制备方法，其中，步骤(1)的具体过程为：将获取的离体足月产妇脐带8-10cm，立即浸泡保存于0℃生理盐水中，在无菌环境下用PBS缓冲液清洗脐带，用手术刀片剔除血管和外膜后获取沃顿胶，然后剪碎至1-3mm³大小，将剪碎组织块均匀放置于培养皿中贴壁培养，待细胞爬出并生长形成密集团簇后，消化获得原代人脐带间充质干细胞，即P0代。

上述技术方案所述的制备方法，其中，步骤(2)的具体过程为：将获得的原代人脐带间充质干细胞传代至培养皿中培养，经培养后在培养皿中扩增得到人脐带间充质干细胞为第一代人脐带间充质干细胞，即P1代；将获得的P1代人脐带间充质干细胞经过二次传代培养后获得P2及P3代人脐带间充质干细胞。