[发明专利]一种抗病砧木根系分泌物收集和提取的方法

说明书

本发明公开了一种抗病砧木根系分泌物收集和提取的方法，涉及蔬菜抗病栽培技术、植物代谢产物提取领域，所述的方法包括供试番茄砧木品种进行育苗、水培收集、萃取和浓缩，即得植株根系分泌物，所述供试番茄砧木品种为番砧1号和/或茄砧21号；本发明的方法操作简单、安全环保，不破坏植株本身，所得根系分泌物纯度高，应用于实际生产中可抑制土壤青枯菌的生物活性，从而缓解番茄产区青枯病高发的问题。

技术领域

本发明涉及蔬菜代谢产物提取和抗病栽培技术领域，尤其涉及一种抗病砧木根系分泌物收集和提取的方法。

背景技术

青枯病是由茄科青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum E.F.Smith，以下简称青枯菌)引起的一种土传性维管束病害，在我国长江以南尤其是华南地区普遍发生，在茄科作物上危害最为严重。番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)营养丰富，产量高，是我国主栽蔬菜品种之一。近年来由于土壤连作、盐渍化程度加剧，在高温多雨的环境条件下青枯病极容易大面积蔓延，常造成重大农业经济损失，常规的化学药剂和生物防治方法难以根治。目前，采用抗病砧木嫁接是防控青枯病的最有效措施，可显著降低番茄的田间发病率。其中，抗病砧木的根系分泌物在提高番茄抗病性的过程中起着重要的介导作用。

根系分泌物(Root exudate)是指在特定环境下，活的植物通过根系释放到根际环境中的物质总称，主要包括由根部输出的低分子有机物、根系代谢物、根系脱落形成的高分子粘胶质及残体分解物等物质。有大量研究表明，植物可通过根系分泌物的作用在根际形成并维持一个特殊的根际微生态环境。植物的种类、品种以及环境条件不同，其根际分泌物组成也不相同，由此根际微生物群落和主要生理种群的数量也随根系分泌物的变化而发生改变。植物通过根系分泌物与根际微生物之间的这种协同作用在植物抵抗病原微生物侵袭的过程中发挥了重要的作用，与植物的抗病性密切相关。有研究表明，抗病番茄砧木的根系分泌物中含有抑制青枯菌增殖的特异活性物质，通过在田间施用能够改良土壤微生物群落结构，显著降低番茄青枯病的发病率。因此，利用抗病番茄砧木的根系分泌物来缓解番茄生产过程中青枯病高发的问题具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于：针对上述存在的问题，提供一种操作简单、效率高且安全环保的抗病砧木根系分泌物收集和提取的方法。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种抗病砧木根系分泌物收集和提取的方法，包括如下步骤：

(1)将供试番茄砧木品种用装有育苗基质的50孔穴盘进行育苗；

(2)播种后待幼苗长至三叶一心时转于装有育苗基质的营养钵中培养，统一进行水肥管理；

(3)幼苗生长至现蕾期后，分别用清水和去离子水将植株根系清洗干净后放入水培收集装置的水培槽中进行水培；

(4)连续通气培养10h后通过水培收集装置进行收集，即得植株根系分泌物粗液；

(5)植株根系分泌物粗液经定容、过滤后，统一调整成相同浓度，得到植株根系分泌物收集液，保存于4℃条件下备用；

(6)将植株根系分泌物收集液用有机溶剂进行等体积萃取，连续萃取3次，合并有机相，再进行旋转蒸干，即得所述抗病砧木根系分泌物。

较佳地，所述育苗基质由以下重量份的原料配制而成：泥炭15-20份、椰糠5-15份、珍珠岩5-15份、蛭石1-5份及菇渣发酵物5-15份。

较佳地，所述供试番茄砧木品种为番砧1号和/或茄砧21号。

较佳地，所述水培在人工气候室内进行，保持室内光源光暗期16h/8h，昼夜温度26℃/20℃，相对湿度50-60％。

较佳地，所述有机溶剂为乙酸乙酯或二氯甲烷；所述旋转蒸干在35-45℃的条件下进行。