[发明专利]一种分泌型靶向Lewis-Y的CAR-T细胞

说明书

本发明公开了一种分泌型靶向Lewis‑Y的CAR‑T细胞，包括靶向Lewis‑Y且分泌IL12细胞因子的CAR‑T细胞；靶向Lewis‑Y且分泌PD‑1抗体的CAR‑T细胞。本发明还公开了该一种分泌型靶向Lewis‑Y的CAR‑T细胞制备方法以及该CAR‑T细胞在制备抗肿瘤的细胞治疗药物中的应用。本发明CAR‑T细胞分泌的PD‑1抗体，特异性的与T细胞表面的PD‑1相结合，阻断PD‑1/PD‑L1信号对T细胞活性的抑制反应，有利于CAR‑T长时间对肿瘤细胞生长产生有效的抑制；本发明CAR‑T细胞分泌的IL12细胞因子，可作用于肿瘤抑制性免疫微环境中的免疫抑制细胞，降低其免疫抑制能力，进而增强CAR‑T细胞的杀伤效果。

技术领域

本发明涉及免疫学、细胞生物学和分子生物学领域，尤其涉及一种可分泌IL12或PD-1抗体且靶向Lewis-Y的CAR-T细胞，此外，本发明还涉及一种利用慢病毒载体制备该细胞的制备方法及该细胞的应用。

背景技术

2016年发表的《Cancer Statistics in China，2015》显示，2015年中国预计有429.2万例新发肿瘤病例和281.4万例死亡病例。其中，死亡率最高的癌症为：肺癌、支气管癌、胃癌、肝癌、食道癌和结直肠癌，占到了所有癌症死亡的四分之三。根据WHO最新公布的数据，我国肿瘤死亡人数约占23％，仅次于心血管疾病。随着我国人口老龄化加剧、工业化进程中带来的环境污染和城市化等因素带来的生活习惯改变，我国居民的肿瘤患病率和死亡率明显提高。肿瘤的传统治疗方式，包括手术、放疗、化疗和靶向治疗，这几种方法都有各自的局限。手术主要是针对早期的肿瘤患者，对于晚期和转移性肿瘤患者效果不佳；放化疗的临床效用相对有限且毒副作用较大；靶向治疗虽然效果明显，见效快，但是很容易产生耐药性。肿瘤免疫治疗是继手术、放疗、化疗后的新的治疗手段，尤其是免疫检查点单抗治疗与CAR-T细胞免疫治疗的崛起，免疫治疗的疗效逐渐获得肯定。2013年，《Science》杂志将肿瘤免疫治疗评选为年度十大科学突破之首。2016年1月，美国基于免疫治疗与靶向治疗发展，提出癌症“登月计划”。

1985年，Rosenberg SA首次向外界公布了LAK联合IL-2治疗恶性黑色素瘤的临床研究结果。之后，在此基础上相继演化了多种方案，如第一代的淋巴因子激活的杀伤细胞疗法(Lymphokine Activated Killer，LAK)，第二代的细胞因子诱导的杀伤细胞疗法(Cytokine Induced Killer cell，CIK)，第三代的肿瘤浸润性淋巴细胞疗法(TumorInfiltrating Lymphocytes，TIL)，第四代的细胞毒性T细胞疗法(Cytotoxic TLymphocytes，CTL)，以及第五代的嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimeric Antigen Receptor-modified T cells，CAR-T)。

嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)：CAR-T细胞治疗是利用基因工程技术将受试者T淋巴细胞体外转染嵌合抗原受体CAR，形成对特定抗原有特异性识别能力的效应T细胞，经过体外扩增后回输到受试者体内，回输的CAR-T细胞通过高效特异的非MHC限制性方式识别特定的肿瘤细胞表面抗原，并对肿瘤细胞完成杀伤。CAR通常编码一个包含单链抗体scFv，以结合肿瘤细胞表面特异性抗原；同时连接有细胞内信号转导结构域，通常为CD28或/和4-1BB共刺激分子及CD3ζ胞内信号域，介导T细胞的活化。2017年，FDA批准了靶向CD19的基于4-1BB的二代CAR-T产品上市。