[发明专利]烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法

说明书

本发明公开了烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法，包括以下步骤：种子消毒，切取种胚进行初代培养，扩繁继代培养，生根培养，生根苗的炼苗和移栽；其中，初代培养和扩繁继代培养所用培养基中含有6‑BA 1.5～3mg/L、NAA 0.5～1mg/L和2,4‑D 0.5～1mg/L；生根培养所用培养基中含有IBA 0.1～1.2mg/L。本发明通过调整植物组织培养过程的植物外源激素的浓度和配比，实现了烟台翠雀的组培快速繁殖，具有愈伤诱导率高，增殖系数高、生根时间短，移栽成活率高的优点，为烟台翠雀组培工厂化繁育提供了便捷的方法和途径。

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体地说，涉及一种烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法。

背景技术

烟台翠雀为山东省特有野生花卉，野生资源稀少，且在其种群自然分布区实生苗较少，同时果实成熟后自然开裂，种子难以采集，再加上自然生态环境日益破坏，现已处于极度濒危状态，影响其种质资源保存以及引种驯化工作。

本发明旨在通过组织培养和快速繁殖技术获得烟台翠雀的无性繁殖体系，从而扩大繁殖系数，为濒危植物种质资源的保护提供可行的方法。

发明内容

本发明的目的是提供烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法。

为了实现本发明目的，本发明提供的烟台翠雀种子胚的组培快速繁殖方法，主要包括以下步骤：种子消毒，切取种胚进行初代培养，扩繁继代培养，生根培养，生根苗的炼苗和移栽。

本发明进行初代培养和扩繁继代培养所用培养基中含有6-BA 1.5～3mg/L、NAA0.5～1mg/L和2,4-D 0.5～1mg/L；优选含有6-BA 3mg/L、NAA 1mg/L和2,4-D 1mg/L。

更优选地，初代培养基和继代培养基均为MS+6-BA 1.5～3mg/L+NAA 0.5～1mg/L+2,4-D 0.5～1mg/L+25～30g/L蔗糖+6～8g/L琼脂。

本发明进行生根培养所用生根培养基中含有IBA 0.1～1.2mg/L，优选0.5～1mg/L。

更优选地，生根培养基为1/2MS+IBA 0.5～1mg/L+25～30g/L蔗糖+6～8g/L琼脂。

前述的方法，在进行生根苗的炼苗时，所用基质为泥炭和珍珠岩按重量比2～3：1(优选3：1)的混合物。

前述的方法，种子消毒具体如下：挑选烟台翠雀发育良好的种子，种子用自来水冲洗60～120min，然后置于70％～75％酒精中消毒3～5s，无菌水冲洗3～5次，饱和漂白粉消毒10～15min，无菌水冲洗3～5次，即可。

前述的方法，初代培养具体如下：消毒后将种胚横切接入初代培养基，进行初代培养28～32天；培养条件为：温度21-25℃，湿度55-75％，光照12～14小时/天，光照强度1500Lx。

前述的方法，扩繁继代培养具体如下：经初代培养所得外植体材料转入继代培养基，进行快速增殖21～28天；培养条件为：温度21-25℃，湿度55-75％，光照12～14小时/天，光照强度1500Lx。

前述的方法，生根培养具体如下：经扩繁继代培养所得外植体材料转入生根培养基，进行生根培养；生根培养分为两个阶段，暗培养阶段：6～12天，温度18-26℃，湿度55-75％，光培养阶段：6～10天，温度18-26℃，湿度55-75％，光照16～20小时/天，光照强度1800-2200Lx。

前述的方法，生根苗的炼苗和移栽具体如下：生根培养的烟台翠雀组培苗根长达到2～3cm时，移至温室大棚闭瓶炼苗3～7天，开瓶炼苗3～7天，然后取出瓶内生根组培苗，洗去培养基，进行根部消毒处理，移栽入穴盘中，穴盘填充基质为泥炭和珍珠岩的混合物，待根系发育完全后移栽到大田。

优选地，用0.2％多菌灵对组培苗根部进行消毒处理。