[发明专利]一种常温保存全血中cfDNA的血液保护液

说明书

本发明公开了一种常温保存全血中cfDNA的血液保护液。本发明提供了全血中cfDNA的血液保护液，包括如下溶质：抗凝剂、防腐剂、核酸酶抑制剂、代谢抑制剂、细胞稳定剂和膜稳定剂；本发明提供的血液游离DNA保存剂，可抑制核酸酶活，保护血液中游离DNA；稳定白细胞，防止白细胞破裂，避免细胞基因组污染游离DNA；可以保证外周血在常温下保存14天，常温运输至少14天，在此期间内不会发生明显变化，有效延长血液样本在室温下的存储时间，对血液样本长距离运输具有极大的帮助，从而节约了游离DNA检测成本，更有利于游离DNA相关检测技术的应用推广。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种常温保存全血中cfDNA的血液保护液。

背景技术

循环游离DNA(Circulating cell free DNA，cfDNA)是存在于人体血液中一种无细胞状态的胞外DNA。作为细胞死亡的标记物，近年来，外周血中的游离DNA在临床上的应用越来越多：在无创伤性产前诊断中，孕妇外周血中的胎儿游离DNA的发现为无创伤性产前遗传病诊断提供了重要的研究方法；与此同时，越来越多的研究表明，外周血游离DNA最有可能成为肿瘤早期诊断的液态活检标志物。与美国相比，虽然其肿瘤发病率为中国的1.6倍，但5年生存率为中国的1.8倍，造成该差异的主要原因之一在于美国肿瘤早期筛查诊断的普及率更高，肿瘤早期筛查主要采取内镜、血液、影像学等检查方法，而对血液中的cfDNA进行早期筛查是很重要且方便的一项检测方法。此外，cfDNA检测已用于多种急性或慢性疾病的诊断和预后评价中，在自身免疫性疾病，中风，败血症，先兆子痫和器官移植排斥中，cfDNA较健康个体呈显著的高水平。

在动物或者人体内采集到的血液称为全血，全血不抗凝分离得到的液体称为血清，全血中加入抗凝剂后，分离所得到的液体称为血浆。在实际检测过程中，无论全血、血清、血浆都有一定的保存期限，在常温液体形势下很容易失效，而外周血中游离DNA的量的多少是一个关键的指标，人外周血中游离DNA含量极少，半衰期短，极易被血液中的DNA酶降解，如果外周血中有白细胞或者核红细胞破裂，那么基因组DNA将降解进入到血浆中污染游离DNA，这会严重影响检测结果。因此，很有必要提供一种用于保护外周血中游离DNA的血液保护液，旨在解决采用现有的外周血中游离DNA的保存方法，外周血中游离DNA保存时间短，易降解，易污染，保存温度低，经济成本高等问题。

发明内容

为了解决现有外周血中游离DNA保存时间短，易降解，易污染，保存温度低，经济成本高等问题，本发明提供一种外周血中游离DNA的保护剂，该保护剂可有效抑制细胞代谢，抑制核酸酶活性，防止血细胞破裂，保护血液中游离DNA。

为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：

本发明的一个目的是提供一种用于全血中cfDNA的血液保护液。

本发明提供全血中cfDNA的血液保护液，包括如下溶质：抗凝剂、防腐剂、核酸酶抑制剂、代谢抑制剂、细胞稳定剂和膜稳定剂；用于常温保存。

进一步，所述抗凝剂包括EDTA盐、柠檬酸钠及枸杞酸钠中的一种或多种组合。抗凝剂的主要作用为防止血液凝固。上述EDTA盐可为EDTA钠盐或EDTA钾盐。

进一步，所述防腐剂包括Proclin300、叠氮钠、二唑烷基脲、咪唑烷基脲、钠羟甲基甘氨酸、二羟甲基脲、2-溴-2-硝基-1，3-二醇、恶唑烷、钠羟甲基甘氨酸及金刚烷季铵中的一种或多种组合。防腐剂的主要作用是防止血液变质。在本发明的一个实施例中，所述防腐剂为Proclin300。

进一步，所述代谢抑制剂包括ATA(金精三羧酸)、丙酮酸、甘油醛、磷酸二羟丙酮、3-磷酸-2-磷酸甘油酸、甘油醛-3-磷酸磷酸、氟化钠及钾代谢抑制剂中的一种或多种组合。代谢抑制剂可以减缓细胞代谢，减少细胞基因组裂解，使基因组DNA更少地混入到游离DNA中。优选的，所述代谢抑制剂为ATA、丙酮酸及甘油醛中的一种或多种任意组合。