[发明专利]一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒

说明书

本发明提供了一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒，含有裂解液；磁珠溶液；蛋白酶K；polyA溶液；去蛋白液；洗涤液；缓冲液。本发明还提供了采用上述的试剂盒提取核酸的方法，先加入样本、裂解液和磁珠进行混匀，然后边裂解边捕获核酸分子，最后分别采用特有的无醇去蛋白液和洗涤液洗涤去除磁珠表面的蛋白质和盐离子等杂质。与常规的病毒核酸提取方法相比较，操作步骤简单，不需要单独加入结合液，实现了裂解和结合同时进行，DNA和RNA共提；整个操作过程中不加入乙醇或异丙醇，抑制物质残留少，实验步骤简便，整个流程下来仅需要40min左右；安全无污染，无氯仿苯酚等有毒试剂，既可以手工操作也可以用于自动化平台。

技术领域

本发明属于生物工程领域涉及一种检测试剂盒，具体来说是一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒。

背景技术

病毒的结构相对简单，由外面的衣壳蛋白和内部的核酸物质组成，根据核酸物质可以将病毒分为DNA病毒或RNA病毒。随着分子生物学的发展，对疾病相关病毒进行检测和分型是分子检测的一个重要应用领域，而从生物材料中高效、简便的提取和纯化目的核酸是分子检测的关键技术。目前病毒核酸纯化技术主要分为三种，分别为传统法、柱膜法和磁珠法。

传统的核酸纯化主要是利用变性剂和表面活性剂进行裂解，释放出核酸后用苯酚、氯仿进行抽提去除蛋白等杂质，然后用乙醇或异丙醇进行沉淀，去除上清后获得核酸沉淀，然后用TB或TE缓冲液进行溶解。该方法步骤繁琐，重复性差，耗时较长，并且使用了有剂试剂。煮沸法也是传统的病毒核酸提取方法之一，但是该方法提取的核酸纯度较低，对检测的灵敏度影响较大。柱膜法是用硅胶膜对核酸进行吸附和纯化，主要是用变性剂和表面活性剂裂解细胞，释放核酸分子，在低pH值、高盐以及醇的条件下结合核酸分子，然后用含有胍盐的乙醇溶液洗涤去除蛋白等杂质，用70％或80％的乙醇溶液去除盐离子，干燥去除残留乙醇后在高pH值、低盐的情况下洗脱核酸，该方法操作相对简便，提取的核酸纯度高，但是不利于自动化操作。磁珠法病毒核酸提取和柱膜法类似，主要是用磁性微球替代柱膜吸附核酸，该方法的优点是能够在仪器上进行操作，进行自动化操作，但是由于磁珠吸附核酸的同时也会吸附蛋白等杂质，所以对结合以及洗涤条件要求比较高，获得高纯度的核酸比较困难。

发明内容

针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒，所述的这种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒要解决现有技术中提取核酸的方法复杂，提取要求较高、提纯困难的技术问题。

本发明提供了一种基于磁珠法的无醇病毒核酸提取试剂盒，包括如下试剂：

裂解液，所述的裂解液中含有浓度为25-75mM的Tris-HCL，所述的Tris-HCL的pH为8.0，浓度3-5M的GTC(异硫氰酸胍)，质量百分比浓度为5-15％的聚多卡醇，质量百分比浓度为5-15％的PEG6000；

磁珠溶液，所述的磁珠溶液的浓度为50-100mg/mL，所述的磁珠为硅羟基或羧基修饰的磁珠；

蛋白酶K，所述的蛋白酶K的浓度为50-100mg/mL；

polyA溶液，所述的polyA的浓度为10-50mM 10mM；

去蛋白液，所述的去蛋白液中含有浓度为1-3M的GTC(异硫氰酸胍)，浓度为的10-20mM Tris-HCL，所述的Tris-HCL的pH为8.0-9.0，质量百分比浓度为5-10％的PEG6000；

洗涤液，所述的洗涤液中含有浓度为10-50mM的Tris-HCL，所述的Tris-HCL的pH为8.0-9.0，质量百分比浓度为5-10％的PEG6000，浓度为200-300mM的Nacl；

缓冲液，所述的缓冲液为浓度为10-20mM的Tris-HCL，所述的Tris-HCL的pH为pH8.0-9.0。