[发明专利]抗非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的抗体

说明书

本发明公开了一种分泌抗非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株为6A4，7F5，7G3或其传代细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.16681。由杂交瘤细胞株6A4，7F5，7G3分泌的单克隆抗体分别为MAb6A4、MAb7F5和MAb7G3。本发明的杂交瘤细胞株能够分泌稳定的非洲猪瘟病毒K205R蛋白抗体，其分泌的单克隆抗体具有高的效价，且亚类单一，能够特异性的和非洲猪瘟K205R蛋白反应，特异性好，可用于检测早期的非洲猪瘟病毒。

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，尤其涉及一种分泌抗非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的抗体。

背景技术

非洲猪瘟（Africa Swine Fever,ASF）是由非洲猪瘟病毒(Africa Swine FeverVirus,ASFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，属于动物疫病。1921年，Montgomery首次报道在非洲的肯尼亚发生非洲猪瘟疫情，2007年以来，非洲猪瘟在全球多个国家发生扩散流行，特别是俄罗斯及其周边地区。2017年3月，俄罗斯远东地区伊尔库茨克州发生非洲猪瘟疫情，疫情发生地距离我国较近。

虽然感染非洲猪瘟后能够产生特异性抗体，但由于非洲猪瘟病毒基因型众多，而不同基因型之间的毒株不能产生免疫保护，所以迄今为止，还没有非洲猪瘟病毒的有效疫苗。目前该病的防控主要依靠严格的动物处理实现，因此建立有效快速的诊断方法尤为重要。

研究表明，非洲猪瘟病毒是一种双链DNA虫媒病毒，病毒基因组长170-190kb，有150多个开放阅读框，能够编码150-200个蛋白，其中K205R是一种大约33 kDa的蛋白质，它是在病毒感染4小时后产生的，在感染6h后，K205R蛋白在细胞的细胞质中扩散，这对检测是否存在持续感染提供了重要的依据，为后期建立非洲猪瘟诊断技术提供基础。K205R作为一种感染早期出现的抗体，对非洲猪瘟病毒的早期诊断具有着重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分泌抗非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其分泌的抗非洲猪瘟病毒K205R蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体可用于诊断早期非洲猪瘟病毒引起的感染。

本发明采用的技术方案是：

一种分泌抗非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其能够分泌稳定的非洲猪瘟病毒K205R蛋白的单克隆抗体。所述杂交瘤细胞株为6A4，7F5，7G3或其传代细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名为：非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体细胞株，保藏日期为：2018年10月11日，保藏号为：CGMCC No.16681，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。所述的杂交瘤细胞株是由非洲猪瘟病毒K205R蛋白免疫小鼠后，取其脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经筛选获得的。

本发明进一步提供了由上述保藏号为CGMCC No.16681的杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株6A4，7F5，7G3分泌的单克隆抗体分别为MAb6A4、MAb7F5和MAb7G3，单抗MAb6A4、MAb7F5和MAb7G3的效价分别可以达到 1:2⁹00，1:2¹²00和1:2¹⁰00，实验测得三种单克隆抗体均为IgG1亚类。

选用杂交瘤细胞株7F5分泌的单抗MAb7F5与全病毒抗原反应时，全病毒抗原的稀释倍数为1:1000，MAb7F5的稀释倍数为1:400时，抗体效价达到最高。