[发明专利]一种可用于细胞生物学领域的马血清的制备方法

说明书

本发明公开了一种可用于细胞生物学领域的马血清的制备方法，还涉及一种可用于细胞生物学领域的马血清的质量检测方法，包括以下步骤：S1、采血：称量供血马体重，计算采血量，对采血马匹剃毛、消毒之后，按照采血量采取适量的血液到采血瓶内，供血马采血间隔不得短于2周，每次采血量不得超过体重的1.1％，具体计算公式如下：总循环血量(升)＝体重(千克)×0.075，工作采血量(升)＝总循环血量(升)×15％；S2、分离：采血后将采血瓶放置15‑20℃沉淀8‑24h，以5000转离心40‑60分钟，静置血清瓶待血清与红细胞明显分层。该可用于细胞生物学领域的马血清的制备方法，为马血清相关性能的判定提供了对应的标准，为马血清今后的应用提供了理论基础。

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种可用于细胞生物学领域的 马血清的制备方法，还涉及一种可用于细胞生物学领域的马血清的检测方法。

背景技术

血清，是指血液凝固后，纤维蛋白原被去除后分离得到的淡黄色透明液 体。它主要由水以及多种化学成分(白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯， 总胆固醇，谷丙转氨酶等)组成，被广泛地用于科学研究、细胞培养和疫苗 生产等，其中以细胞培养为主导。胎牛血清所含有的生长因子是一种几乎可 促进所有类型细胞生长的万能因子，使用添加胎牛血清的培养基可以减少培 养各类型新细胞所需的时间，并容易得到最优化的培养基配方。胎牛血清的 缓冲能力可以抗击对细胞培养体系的各种干扰，抗击由于pH的变化、重金属离子的影响、蛋白水解活性物质和细菌内毒素等所引起的毒性效应。胎牛血 清以上种种优点使其广泛应用于细胞基础培养并且具有不可撼动的地位。

细胞培养中使用牛血清存在污染外源病毒和致病因子的风险。除此之外， 由于不同批次牛血清间的生物活性和因子的不一致，易导致产品和实验结果 的重现性差。更进一步说，牛血清在血清市场上长期扮演主角，使得血清来 源单一，牛血清一旦出现问题将会导致血清供不应求，因此找寻一类可以用 于细胞培养的血清已然成为必需。

血清除了胎牛血清还包括小牛血清、成牛血清、马血清、羊血清、鸡血 清、兔血清及小白鼠等实验动物血清。虽然血清种类繁多，但是并没有一种 血清可以在细胞培养方面发挥与牛血清相当的作用。马在体型上与牛较为相 似，而且中国马匹来源较多，为其应于细胞培养提供了前提。

众所周知，血清是否质量过关以及是否可以支持细胞增殖是其能否走向 血清市场或者在生物学方面得以广泛应用的关键。因此，对于血清的质量检 测已然成为关键的第一步。更进一步说，细胞培养的条件就要求血清必须无 菌、无病毒，其次具备支持细胞增殖的能力。我国在对牛血清的质量标准最 早在2000年版《中国生物制品主要原辅材料质控标准》中提出。包括物理性 状、总蛋白，血红蛋白、细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、 细菌内毒素等。WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中也 对牛血清质量提供了相应的标准要求。目前的这些标准都是针对牛血清的， 然而关于其他血清却没有相应的标准。

因此针对这一现状，迫切需要设计一种可用于细胞生物学领域的马血清 的制备方法和检测方法，以满足实际使用的需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于细胞生物学领域的马血清的制备方法 和检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种可用于细胞生物学领 域的马血清的制备方法，包括以下步骤：

S1、采血：称量供血马体重，计算采血量，对采血马匹剃毛、消毒之后， 按照采血量采取适量的血液到采血瓶内，供血马采血间隔不得短于2周，每 次采血量不得超过体重的1.1％，具体计算公式如下：总循环血量(升)＝体重 (千克)×0.075，工作采血量(升)＝总循环血量(升)×15％；