[发明专利]一种由两个调制峰求全二维色谱法中第一维色谱峰的方法

说明书

本发明公开了一种由两个调制峰求全二维色谱法中第一维色谱峰的方法，包括以下步骤：(1)初步设定¹σ＝P_M/3；(2)设置第一维峰面积为两调制峰的面积之和；(3)结合公式1和公式2，通过非线性规划法求出在所设定的¹σ值条件下的最优¹t_R值；(4)判断步骤(3)所推导的结果是否正确以及根据判断结果所采取的后续步骤。本发明提供的这种方法，具有以下优点：(1)可凭两个调制峰即可推导出全二维色谱法中第一维色谱峰，特别适用于欠采样条件下所得到的全二维色谱法中第一维色谱峰的推导；(2)该方法准确性高，可使计算所得的保留时间的误差比较小。

技术领域

本发明属于分析化学领域，涉及色谱，更具体地，涉及全二维色谱法中第一维色谱峰特别是色谱峰保留时间的推导方法，以辅助未知物的定性分析。

背景技术

在色谱法中，为了提高对未知物进行定性分析的准确性，常需测定未知物的色谱的保留时间。对于全二维色谱，可以分别测定其第一维和第二维色谱保留时间。对于某化合物的在全二维色谱中第一维色谱的保留时间，可以从以下三个方法来得到：

1、将全二维色谱法改为普通的一维色谱，通过一维色谱实验来测定目标化合物的保留时间。此方法虽然步骤简单，并不需要额外的计算来推导目标化合物的保留时间，但由于复杂的样品常常存在共流出峰的现象，因此鉴定哪个峰是目标化合物比较困难，不容易确定其保留时间。

2、通过全二维色谱所得到的目标化合物的一组调制峰中面积最大的峰的保留时间，来近似代替第一维色谱峰的保留时间。此法虽简单易行，但其误差可达到一个调制周期的数量级，以其结果辅助化合物的定性鉴别，结果往往不可靠。

3、通过全二维色谱所得到的目标化合物的一组调制峰来模拟计算其第一维色谱的保留时间。其基本原理在于：目标化合物的第一维色谱峰可以通过高斯公式(如下公式1)来近似的描述：

公式1：

其中S(t)检测器的响应值；t为分析时间；A、¹t_R和¹σ分别为色谱峰的峰面积、保留时间和标准差。因此要确定一个色谱峰需知道其三个参数，即A、¹t_R和¹σ。

该一维色谱峰在全二维色谱法的调制器调制下，会分裂为数个调制峰。从以下定积分公式(公式2)可计算出某个理论调制峰的保留时间和峰面积：

公式2：

其中Ar_n某个调制峰的峰面积；x_n为某次调制器的释放时间(release time)，x_n+1为下一次调制器的释放时间。x_n可通过x_n＝(nP_M)+x₀来计算,其中P_M为调制周期，x₀为调制器工作的起始时间。

按照相反的过程，也可以从调制峰的保留时间和峰面积推出公式1，也即推导出第一维色谱峰。由于公式1有三个未知数(A、¹t_R和¹σ)，因此需要从全二维色谱实验得到3个以上的调制峰，方可通过解方程的方法结合公式1和2求出公式1中的A、¹t_R和¹σ。

通过三个以上的调制峰来推导第一维色谱峰，其准确度和精密度高，是目前色谱软件中最常用的方法。但此法需要三个以上的调制峰，有时并不能满足要求。其原因在于在用全二维色谱法来分析复杂化合物时，为了避免某强保留化合物在不能在一个调制周期内流出的现象(wrap around effect)，往往采用比较长的调制周期，从而导致调制峰的数目只有两个，也即所谓的欠采样(under-sampling)现象。