[发明专利]应用于对虾病原高通量检测的玻片微量检测系统

说明书

本发明属微生物检测领域，尤其涉及一种应用于对虾病原高通量检测的玻片微量检测系统。该系统包括设有检测扩增池的微量检测玻片、微量移液器以及用于可视化核酸扩增检测的成像设备；其中，所述检测池设有预包被的反应试剂和特定病原的特异性引物。本发明在已建立的对虾病原核酸恒温扩增新技术的基础上，开发了一款玻片微量检测系统，具有检测试剂低耗化、设备微型化、操作便捷化等优势；是一种快速便携、低耗低廉、灵敏特异以及高通量检测分析手段。

技术领域

本发明属微生物检测领域，尤其涉及一种应用于对虾病原高通量检测的玻片微量检测系统。

背景技术

截止2018年，被世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health，OIE)《水生动物卫生法典》收录的甲壳类疫病共有11种，未收录的其他对虾疾病10余种，新发对虾疫病2种。2018年，本课题组在我国广东、广西、海南等主要养殖对虾的9个省市开展了对虾的流行病学调查，其中，主要疫病阳性检出率依次为偷死野田村病毒(Covertmortality nodavirus,CMNV)(29.15％)、对虾肠孢子虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)(17.07％)、致急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌(Acute hepatopancreas necrosisdisease-causing Vibrio parahaemolyticus,VpAHPND)(13.21％)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus，IHHNV)(8.70％)、对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)(6.82％)、桃拉综合征病毒(Taura syndrome virus,TSV)(6.82％)、虾血细胞虹彩病毒(Shrimp hemocyteiridescent virus,SHIV)(5.66％)、黄头病毒(Yellow head virus,YHV)(0.0％)和传染性肌坏死病毒(Infectious myonecrosis virus,IMNV)(0.0％)，威胁对虾养殖的病原多，且呈混合感染。当前，对虾病原监测主要是采用收集样品后在实验室基于核酸分析的检测，聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)、实时定量荧光PCR(Real-time PCR)及基因芯片等技术以其灵敏度高、检测快速、多目标分析而被广泛应用。然而此类分析需要特殊的仪器设备，如PCR仪以及配套的电泳仪和凝胶成像仪、实时荧光PCR仪、基因芯片扫描仪等，耗时费力，成本昂贵，不适合简便快速分析。因此，开发高通量、高灵敏、低成本的适用于现场即时分析的新型病原检测技术势在必行。

基于核酸恒温扩增技术(Nucleic acid isothermal amplificationtechnology,NAIAT)的核酸检测方法能够实现快速、简单、高效的扩增，且对仪器依赖性低，非常适用于现场快速检测(Point-of-care test,POCT)中，是一种极具应用潜力的核酸分析手段。本课题组近年来致力于对虾病原快速检测技术的研究，将NAIAT应用于对虾病原检测中，目前已成功研制出对虾WSSV、IHHNV、TSV、YHV、SHIV等一系列现场快速灵敏检测技术和检测试剂盒，但在实际应用中，存在一定的局限性：(1)基于肉眼判读的可视化结果的精确性存在局限性；(2)一次样本仅单重检测，很难实现多重目标的同时检测且检测成本过高；(3)操作流程的便捷性还有待进一步提高。

低体积PCR技术已被用于单细胞分离和检验，基于NAIAT的低体积扩增主要集中于研究微流控芯片技术。近年来，基于微流控芯片的核酸研究技术发展势头强劲，如，微流控芯片数字PCR技术和基于NAIAT的微流控芯片系统；然而基于微流控芯片技术的扩增检测，一般需要高精密的仪器设备，芯片的研发成本和生产成本均很昂贵，限制了其在临床快速检测中的应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是基于微流控芯片技术的扩增检测，一般需要高精密的仪器设备，芯片的研发成本和生产成本均很昂贵，限制了其在临床快速检测中的应用。