[发明专利]一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法

说明书

本发明公开了一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图的建立方法。该方法具有简便、稳定、精密度高、重现性好等优点；用该方法还能较为全面地反映黑骨藤有效部位群中所含化学成分的种类与数量，进而对其质量进行整体描述和评价。且用该方法检测到的黑骨藤有效部位群指纹图谱化学成分相对较多、各特征峰高度比例适中，基线较平稳，分离度、峰形均较好，柱效较高。

技术领域

本发明涉及一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图的建立方法，属于药品技术的领域。

背景技术

黑骨藤(Periploca forrestii Schltr.)属于萝摩科(Asclepiadaceae)杠柳属(Periploca)植物，收载于2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》，具有祛风除湿、活血通络、消痹止痛的功能，可舒筋活络、祛风除湿；主治风湿性关节炎、跌打损伤、胃痛、消化不良、闭经、痢疾等。黑骨藤是常用苗药之一，是黑骨藤追风活络胶囊、黑骨藤伸筋透骨液、黑骨藤伸筋透骨喷雾剂的重要组成药味。

中药指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。在此基础上，如果进一步开展谱效学研究，可使中药质量与其药效真正结合起来，有助于阐明中药作用机理。目前，尚无黑骨藤有效部位群HPLC指纹图谱研究工作的报道。

发明内容

本发明目的在于，提供一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图的建立方法。该方法具有简便、稳定、精密度高、重现性好等优点；用该方法还能较为全面地反映黑骨藤中所含化学成分的种类与数量，进而对其质量进行整体描述和评价。且用该方法检测到的黑骨藤指纹图谱化学成分相对较多、各特征峰高度比例适中，基线较平稳，分离度、峰形较好，柱效较高。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现：一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，包括以下步骤：

(1)混合对照品溶液的制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C标准品，用甲醇定容为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C浓度均为0.005-0.015g·mL^-1混合对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：精密称定黑骨藤粗粉100.0g，用乙醇回流提取，抽滤，浓缩，用蒸馏水定容1000mL，得样品溶液；精密称取D101大孔吸附树脂装入层析柱，蒸馏水冲洗至层析柱下端流出液体清澈无色后，将样品溶液上样进行吸附，待吸附完全后以蒸馏水洗脱，然后以乙醇洗脱，收集层析柱流出的乙醇部分，浓缩，烘干，研磨，得黑骨藤有效部位群粉末；精密称取黑骨藤有效部位群粉末，用甲醇定容，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，得供试品溶液；

(3)指纹图谱的制作：色谱条件：色谱柱：Xtimate C₁₈，4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸水溶液(B)；梯度洗脱，检测波长360nm，流速1mL·min^-1，柱温38℃，进样量10μL；记录谱图得到黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图谱；

(4)标准指纹谱图的确认：按照上述提供的方法，对多批次黑骨藤有效部位群建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较确定了24个共有峰，这些共有峰构成了黑骨藤有效部位群的指纹特征，作为黑骨藤有效部位群的标准指纹图谱。

前述的黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法中，所述混合对照品溶液这样制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C标准品，用甲醇定容为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C浓度均为0.01mg·mL^-1混合对照品溶液。