[发明专利]一种奥贝胆酸的高效液相色谱分析方法

说明书

本发明公开了一种奥贝胆酸的高效液相色谱分析方法，采用电喷雾检测器(CAD)的反相高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：a、制备供试品溶液；b、采用带电喷雾检测器(CAD)的反相高效液相色谱对供试品溶液进行检测；其中洗脱采用梯度方式洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为甲醇，流动相C为甲酸水溶液或乙酸水溶液中的任意一种。本发明提供的奥贝胆酸的高效液相分析方法，采用电喷雾检测器(CAD)，检测灵敏度高，具有简单、准确、可靠、理论塔板数高等优点，能够有效测出奥贝胆酸含量。

技术领域

本发明属于药物分析检测领域，涉及一种奥贝胆酸的高效液相色谱分析方法。

背景技术

奥贝胆酸属法尼醇X受体激动剂，通过活化法尼醇X受体，间接抑制细胞色素7A1(CYP7A1)的基因表达。由于CYP7A1是胆酸生物合成的限速酶，因此奥贝胆酸可以抑制胆酸合成，用于治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。其结构式为

奥贝胆酸由美国Intercept制药公司研发成功，是二十年来首个研发用于治疗胆汁淤积性肝病的药物。研究用于那些对旧标准治疗药物熊去氧胆酸没有充分应答或不能耐受的患者。安慰剂对照的三期临床试验中，奥贝胆酸(OCA)提高了与肝移植风险降低相关的两个生物标志物的水平。临床研究的复合终点是碱性磷酸酶至少下降15％，血清碱性磷酸酶的活性低于正常上限的1.67倍，而胆红素在正常范围内，碱性磷酸酶是用来表示肝脏疾病严重程度的一种生物标记物。

CN106645497A公开了一种奥贝胆酸及其制剂中有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法，使用C18柱；二极管阵列检测器，柱温20～30℃；流动相为磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇溶液，进行等梯度洗脱。该方法中没有对奥贝胆酸产品定量分析的数据支持。

CN107917972A公开了一种高效液相色谱分析奥贝胆酸及其合成中间体的方法，使用C18柱，示差检测器；柱温35～40℃；流动相为磷酸盐缓冲液-乙腈-甲醇混合溶液，进行等梯度洗脱。该方法主要针对的是其与中间体的分离检测，并没有对奥贝胆酸产品进行定量分析。

CN108680696A公开了一种奥贝胆酸起始物料的检测方法，使用C18柱，电喷雾检测器，雾化温度30～80℃；柱温35～40℃；流动相为A：0.05％三氟乙酸水溶液-B：乙腈混合溶液，进行梯度洗脱，流动相A 0～9min 50％运行，9～12min从50％→20％，运行至15min。该方法主要针对的是奥贝胆酸起始物料的检测，并没有对奥贝胆酸产品进行定量分析。

目前奥贝胆酸并没有统一的质量标准，为了保证奥贝胆酸后续的研究和生产质量，需要对奥贝胆酸原料药进行质量控制。因此，开发一种稳定性好、重复性好、准确快速的分析方法显得尤为重要。

发明内容

本发明目的在于提供一种稳定性好、重复性好、操作简单、理论塔板数高、准确可靠，能够对奥贝胆酸进行定量分析的高效液相色谱分析方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种奥贝胆酸的高效液相色谱分析方法，采用电喷雾检测器(CAD)的反相高效液相色谱法进行检测，包括以下步骤：

a、制备供试品溶液；

b、采用带电喷雾检测器(CAD)的反相高效液相色谱对供试品溶液进行检测；

其中洗脱采用梯度方式洗脱，流动相A为乙腈，流动相B为甲醇，流动相C为甲酸水溶液或乙酸水溶液中的任意一种，先使用流动相A和流动相C混合溶液洗脱，然后使用流动相A、流动相B和流动相C混合溶液洗脱，最后再使用流动相A和流动相C混合溶液洗脱。

作为上述前处理方法的进一步改进，流动相C的pH为3.5。

作为上述前处理方法的进一步改进，梯度洗脱程序为：